ESTRAZIONE DEL DNA.

Presentazione sul tema: "ESTRAZIONE DEL DNA."— Transcript della presentazione:

1 ESTRAZIONE DEL DNA

2 L’ESTRAZIONE DEL DNA E’ COMPOSTA DA CINQUE FASI:
1 Soluzione di Estrazione 2 Omogenizzazione 3 Filtrazione 4 Deprotenizzazione 5 Flocculazione

3 PRIMA FASE: SOLUZIONE DI ESTRAZIONE
Materiali: 3 g di Sale (NaCl) 80 cc di acqua 10 cc detersivo per piatti becker da 100 cc bacchetta di vetro imbuto piccolo bilancia digitale

4 PRIMA FASE: SOLUZIONE DI ESTRAZIONE
Prepariamo la soluzione: pesiamo 3 g di sale fino Versiamo il sale in 80 cc di acqua Mescoliamo fino alla dissoluzione del sale aggiungiamo 10 cc di detersivo portiamo la soluzione a 100cc mescoliamo con la bacchetta per omogenizzare la soluzione senza fare schiuma

5 Perché abbiamo fatto ciò?
Poiché il DNA è contenuto nel nucleo delle cellule della frutta, per liberarlo, è necessario demolire le membrane cellulari e quelle del nucleo.

6 Queste membrane sono costituite da fosfolipidi, molecole ricche di grassi, per scioglierle abbiamo usato il detersivo liquido per piatti. Abbiamo usato anche del sale che ha la funzione di facilitare l'eliminazione delle proteine su cui è avvolto il DNA (gli istoni).

7 SECONDA FASE: OMOGENIZZAZIONE
Materiali: 100 g di kiwi Becker da 250 cc coltello Mortaio

8 SECONDA FASE: OMOGENIZZAZIONE
Prepariamo la poltiglia: Tagliamo il kiwi in piccoli pezzi Schiacciamo il kiwi con il mortaio Versarsiamo la poltiglia ricavata in un becker da 250 cc Aggiungiamo la soluzione di estrazione

9 SECONDA FASE: OMOGENIZZAZIONE
Prepariamo la poltiglia: Poniamo il beker a bagnomaria a 60° per 20’ mescolando ogni 2-3-’. Trasferiamo il beker in ghiaccio per 10’ per uniformare la temperatura

10 Perché abbiamo fatto ciò?
Questa operazione ha la funzione di separare le cellule le une dalle altre e di esporle direttamente della soluzione di estrazione.

11 TERZA FASE: FILTRAZIONE
Materiali: Colino Carta da filtri Becker da 250 cc Bacchetta di vetro

12 TERZA FASE: FILTRAZIONE
Filtriamo: Mettiamo il colino sul becker Posizioniamo la carta da flitri sul colino Versiamo la poltiglia sul filtro Mescoliamo con cura per favorire la filtrazione del liquido ricco di DNA

13 Perché abbiamo fatto ciò?
Con questa operazione, si raccoglie un liquido ricco di DNA, separandolo dai residui cellulari e dagli altri tessuti del frutto che verranno scartati.

14 QUARTA FASE: DEPROTENIZZAZIONE
Materiali: 5 cc di soluzione filtrata 1 cc di succo d’ananas

15 QUARTA FASE: DEPROTENIZZAZIONE
Procedimento: Versiamo in una provetta 5 cc di soluzione filtrata Aggiungiamo 1 cc di succo di ananas e misceliamo Aspettiamo 5 minuti per lasciare il tempo alla bromelina il tempo di agire

16 Perché abbiamo fatto ciò?
Con questa operazione si ottiene un DNA più puro, ma ai fini dell'osservazione del DNA non è indispensabile. Il DNA è avvolto attorno a proteine chiamate istoni.

17 Per allontanarle, si possono usare enzimi proteolitici quale per esempio la "Proteasi". E' possibile sostituirla efficacemente con una sostanza più facile da reperire. Si tratta del succo di ananas, il quale contiene la bromelina, un’enzima capace di demolire le proteine negli amminoacidi di cui sono composte e di facilitarne quindi l'eliminazione.

18 QUINTA FASE: FLOCCULAZIONE
Materiali: Alcool freddo con volume pari alla soluzione

19 QUINTA FASE: FLOCCULAZIONE
Procedimento: Versiamo lentamente l’alcool nella provetta evitando che si mescoli con il filtrato Lasciamo riposare la provetta per 5 minuti per consentire al DNA di precipitare e di raccogliersi ALCOOL

20 Perché abbiamo fatto ciò?
Il DNA poiché è molto solubile in acqua e insolubile in alcool per renderlo visibile occorre aggiungere dell’alcool nel quale precipita . Ora, all'interfaccia fra l'alcool e il sottostante filtrato si osserva una sostanza bianchiccia, la cui quantità tende ad aumentare col tempo. Si tratta del DNA del kiwi.

21 DNA DEL KIWI