Con la tecnica della PCR si può amplificare in modo specifico e ripetitivo qualsiasi segmento di DNA compreso tra due particolari sequenze nucleotidiche.

Presentazione sul tema: "Con la tecnica della PCR si può amplificare in modo specifico e ripetitivo qualsiasi segmento di DNA compreso tra due particolari sequenze nucleotidiche."— Transcript della presentazione:

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2 Con la tecnica della PCR si può amplificare in modo specifico e ripetitivo qualsiasi segmento di DNA compreso tra due particolari sequenze nucleotidiche. La sua importanza risiede proprio nel riuscire ad individuare facilmente particolari sequenze nella quantità desiderata.

3 La PCR avviene grazie ad uno strumento detto termociclatore che costituisce un’importante innovazione per i biologi. È formato da una piastra riscaldata in cui vengono inseriti i campioni di DNA. Per realizzare il meccanismo della PCR si necessita di: -Nucleotidi trifosfati come ATP e GTP; -Primer; -TAQ (una polimerasi estratta da un termofilo, il Termus Aquaticus, in grado di non denaturarsi ad elevate temperature; -Buffer (tamponi necessari per la reazione di elongazione). La PCR avviene in tre fasi: -Denaturazione (a circa 90°); -Appaiamento (a circa 60°); -Allungamento (40°).

4 La corrente elettrica fa muovere le molecole di DNA, cariche negativamente, attraverso la matrice porosa del gel che rallenta le molecole più grandi durante il loro percorso verso l’elettrodo positivo. Un colorante speciale rende visibili le molecole di DNA che si raggruppano in posizioni diverse nel gel a seconda delle loro dimensioni.

5 - In campo medico: La PCR viene utilizzata per la diagnostica microbiologica e per l’evidenziazione di tumori liquidi quando non sono evidenziabili con altri metodi.

6 Prima della nascita: si utilizzano cellule fetali ottenute attraverso la villocentesi o l’amiocentesi, sono necessari anche tamponi buccali della madre e del presunto padre. Se il profilo genetico del padre presunto e del feto differiscono per due o più caratteristiche genetiche, l’esclusione è certa, se invece i due profili concordano vi è un’attribuzione della paternità, Dopo la nascita: si utilizza il consueto esame del DNA tramite PCR prelevando delle cellule con una spatola dalle guance del neonato e del padre putativo.

7 Si utilizza la rivelazione degli amplificati, sono frammenti di DNA della medesima lunghezza, nota perché determinata dalla maniera in cui sono stati costruiti i primers. La loro rivelazione viene eseguita attraverso elettroforesi su gel di agarosio.

8 There was a time when to amplify DNA, You had to grow tons and tons of tiny cells. Then along came a guy named Dr. Kary Mullis, Said you can amplify in vitro just as well. Just mix your template with a buffer and some primers, Nucleotides and polymerases, too. Denaturing, annealing, and extending. Well it’s amazing what heating and cooling and heating will do… PCR, when you need to detect mutations. PCR, when you need to recombine. PCR, when you need to find out who the daddy is. PCR, when you need to solve a crime. C'era un tempo quando per amplificare il DNA dovevi coltivare tonnellate di delicate cellule. Poi ci fu un ragazzo di nome Dr. Kary Mullis, che diceva che si poteva fare in vitro. Basta mescolare lo stampo col tampone e alcuni primer, nucleotidi e anche polimerasi. Denaturando, riscaldando ed estendendo. È sorprendente cosa scaldare, raffreddare e riscaldare possa fare… PCR, quando devi trovare mutazioni. PCR, quando devi ricombinare. PCR, quando devi scoprire chi è papà. PCR, quando devi risolvere un crimine. Click here!

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