Sindromi linfoproliferative croniche

Presentazione sul tema: "Sindromi linfoproliferative croniche"— Transcript della presentazione:

1 Sindromi linfoproliferative croniche
Caratteristiche comuni Espansione della malattia più per accumulo che per attiva replicazione. Cellule arrestate in fase G0 del ciclo cellulare per meccanismo di inibizione dell’apoptosi. Decorso spesso indolente. Difficile eradicazione. Possibilità di trasformazione verso una forma più aggressiva.

2 MALATTIE LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE
LEUCEMIE CRONICHE B-LLC B-PLL HCL T-LGL NK-LGL LINFOMI LEUCEMIZZATI FOLLICOLARI MANTELLARI DELLA ZONA MARGINALE

3 SINDROMI LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE
Linfocitosi in presenza o meno di linfoadenomegalie, epato-splenomegalia; sviluppo di anemia, piastrinopenia, ipogamma-globulinemia, sintomi sistemici Oggi diagnosi spesso occasionale nel 70-80% dei casi Diagnosi definitiva basata sulla combinazione di linfocitosi con morfologia e immunofenotipo caratterisitci

4 SINDROMI LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE
LINFOCITOSI LINFOADENOMEGALIA

5 IMMUNOFENOTIPO IN EMATOLOGIA ASPETTI DIAGNOSTICI
LINFOCITOSI ASSOLUTA Il valore assoluto dei linfociti è > 5000/ml RELATIVA % dei linfociti è superiore a quella dei neutrofili

6 REATTIVA O NEOPLASTICA?
ASPETTI DIAGNOSTICI LINFOCITOSI REATTIVA O NEOPLASTICA? (quantità+qualità)

7 IMMUNOFENOTIPO IN EMATOLOGIA
Linfocitosi>5x109L Le linfocitosi benigne o “reattive” sono espansioni di linfociti T e B policlonali. I disordini linfoproliferativi maligni sono caratterizzati da una proliferazione di linfociti B o T monoclonali.

8 SINDROMI LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE: DIAGNOSI
Morfologia Citochimica Immunofenotipo Citogenetica Genetica molecolare Profilo genomico

9 SINDROMI LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE DIAGNOSI
MORFOLOGIA + IMMUNOFENOTIPO

10 SINDROMI LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE ASPETTI MORFOLOGICI
Leucemia Linfatica Cronica Tipica Mista

11 SINDROMI LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE ASPETTI MORFOLOGICI
Linfoma Follicolare

12 SINDROMI LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE ASPETTI MORFOLOGICI
Linfoma Mantellare

13 SINDROMI LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE ASPETTI MORFOLOGICI
Linfoma splenico a linfociti villosi

14 SINDROMI LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE ASPETTI MORFOLOGICI
Leucemia a prolinfociti

15 MALATTIE LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE IMMUNOFENOTIPO
Definizione diagnostica Identificazione di fattori prognostici Identificazione di sottotipi a diversa prognosi Identificazione della malattia minima residua

16 + Accessibilità delle cellule neoplastiche Disponibilità di AcMo
MALATTIE LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE IMMUNOFENOTIPO Accessibilità delle cellule neoplastiche + Disponibilità di AcMo “Stabilità fenotipica” IDENTIFICAZIONE DI PATTERN CARATTERISTICI

17 SINDROMI LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE IMMUNOFENOTIPO
ANTIGENI LEUCOCITARI E NOMENCLATURA CD ANTICORPI MONOCLONALI CONTRO ANTIGENI LEUCOCITARI RAGGRUPPATI IN BASE ALLA REATTIVITA’ CON MOLECOLE IDENTICHE MARKERS DI PRECUSORI: CD90,CD133,CD34 MARKERS DI LINFOCIT B: CD19, CD20, CD79,CD10 MARKERS DI LINFOCITI T: CD2. D7, CD3, CD4 , CD8 MARKERS DI CELLULE NK: CD7, CD56, CD57, CD158 MARKERS NON RISTRETTI A UNA LINEA DI DIFFERENZIAZIONE: CD11b, CD11c, CD25, CD38, CD27

18 IMMUNOFENOTIPO Identificazione di una popolazione cellulare
un tessuto (biopsia) una sospensione (aspirato midollare, linfonodo, sangue periferico, liquor,versamenti biologici) Caratterizzazione di una popolazione cellulare linea di appartenenza stadio di differenziazione asincronia di maturazione presenza di aberrazioni

19 MALATTIE LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE IMMUNOFENOTIPO
Possibilita’ di studiare sangue intero (periferico e/o midollo) Sviluppo di strategie di analisi multiparametriche per meglio identificare la popolazione da analizzare Possibilita’ di impiegare reagenti e tecniche di permeabilizzazione della cellula Sviluppo di tecniche per la quantificazione dell’espressione antigenica

20 APPROCCIO MULTIPARAMETRICO (FSCvsSSC, FSCvsFL, SSCvsFL, FLvsFL)
MALATTIE LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE IMMUNOFENOTIPO METODI DI ANALISI APPROCCIO MULTIPARAMETRICO (FSCvsSSC, FSCvsFL, SSCvsFL, FLvsFL) DETERMINAZIONE QUANTITATIVA (% cellule positive) DETERMINAZIONE QUALITATIVA (MESF, MFI)

21 MALATTIE LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE IMMUNOFENOTIPO
NON PUO’ PRESCINDERE DALLA CONOSCENZA DELLE CARATTERISTICHE MORFOLOGICHE

22 NORMALE LLC LNH NORMALE HC LNH

23 FREQUENZA RELATIVE DELLE DIVERSE POPOLAZIONI NEL SANGUE PERIFERICO E NEI TESSUTI LINFOIDI (%)
LN TONSILLE MILZA INFANZIA ADULTO 2-5aa 5-15aa B-LIN 24 17 12 41 51 55 CD3+ 64 68 72 56 49 31 CD4+ 37 38 44 48 42 CD8+ 26 10 6 14 NK 13 1 <1 15

24 NEOPLASIE EMATOLOGICHE METODI DI ANALISI
APPROCCIO MULTIPARAMETRICO R1 R2 R3 R4 R5

25 MALATTIE LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE
B-LLC B-PLL HCL MCL FL SLVL SmIg +++ ++ CD19 CD5 + - CD20 CD23 CD11c FMC7 CD25

26 NORMAL PERIPHERAL AND BONE MARROW B CELL SUBSETS: % OF B CELLS

27 MALATTIE LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE
I marcatori espressi dal linfocito B neoplastico sono molteplici e “l’importanza” di ciascuno di essi è diversa. Tuttavia, la diagnosi immunofenotipica di malattia linfoproliferativa cronica B può essere posta solo in presenza di restrizione clonale k o l delle catene leggere delle immunoglobuline !!!!!!!

28 LINFOCITOSI B MONOCLONALI MLUS O CLUS
NEL SANGUE PERIFERICO<5X109/L KAPPA:LAMBDA >3:1 O <0.3:1 25% DELLE CELLULE NON ESPRIMONO O ESPRMONO A BASSA INTENSITA’ sIG IMMUNOFENTOTIPO SOVRAPPONIBILE A QUELLO DELLE PIU’ COMUNI SLC (CD5+/CD23+; CD5+/CD23-; CD5-) LINFOCITOSI STABILI PER ALMENO 3 MESI OBIETTIVITA’ NEGATIVA POPOLAZIONI LINFOCITARIE CON FENOTIPO DA SLC MA CHE NON ESPRIMONO CATENE LEGGERE

29 Incidentally Identified Minute Clonal B-Lymphocyte Populations in Peripheral Blood and Bone Marrow

30 Clonal B cells (orange) in bone marrow with an immunophenotype characteristic of chronic lymphocyticleukemia

31 SINDROMI LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE T: IMMUNOFENOTIPO
FEATURE T-PLL LGL Leukemia Sezary Syndrome ATLL MORPHOLOGY prolymphocyte large granular lymphocytes cerebriform flower cell  CD4+/CD8- CD4-/CD8+ PHENOTYPE CD4+/CD8+ NK markers+ CD7+

32 SINDROMI LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE T: IMMUNOFENOTIPO
ISOFORME CD 45 ISOFORME CD 158 COME SURROGATI DI MONOCLONALITA’

33 SINDROMI LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE T: IMMUNOFENOTIPO
For T cell or NK cell malignancies, there is no convenient clonal marker that can be demonstrated by cell surface marker studies, although in many cases the finding of an abnormal T cell phenotype is strong evidence for a T cell malignancy. To prove clonality for T cell malignancies, gene rearrangement studies need to be performed

34 MFI= INDICE MEDIO DI FLUORESCENZA
SINDROMI LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE INTENSITA’ DI ESPRESSIONE ANTIGENICA MFI= INDICE MEDIO DI FLUORESCENZA M1 CTR SmIg M2 Intensità media M2 Intensità media M1 MFI: intensità media M intensità media M1

35 B-Nor. B-LLC B-PLL HCL MCL FL
IMMUNOFENOTIPO IN EMATOLOGIA MALATTIE LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE ESPRESSIONE ANTIGENICA B-Nor. B-LLC B-PLL HCL MCL FL SmIg CD // // // CD // // // 33 FMC // CD // CD11c // // MFI

36 IMMUNOFENOTIPO IN EMATOLOGIA MALATTIE LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE
LLC

37 CARATTERISTICO IN TUTTI GLI STADI
LLC IMMUNOFENOTIPO: Linfociti B monoclonali CD5+, CD23+e SmIg a bassa intensità. CD19 CD 5 kappa SmIg CARATTERISTICO IN TUTTI GLI STADI CD23

38 IMMUNOFENOTIPO E PROGRESSIONE:
LLC IN PROGRESSIONE MORFOLOGIA

39 LLC IN PROGRESSIONE IMMUNOFENOTIPO CD5 CD19 CD20 SmIg CD23

40 SINDROMI LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE: IMMUNOFENOTIPI ABERRANTI
ASINCRONIA DI ESPRESSIONE ESPRESSIONE ABERRANTE VARIAZIONI DELLE CARATTERISTICHE FISICHE MALATTIA MINIMA RESIDUA

41 ESPRESSIONE ABERRANTE DI CD22 NELLE MALATTIE LINFOPROLIFERATIVE A BASSO GRADO
LN NORMALE BM NORMALE L LINFOPLASMOCITICO LLC MCL L ZONA MARGINALE FCL HCL

42 MALATTIE LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE MALATTIA MINIMA RESIDUA
Approccio analitico multiparametrico Utilizzo di più combinazioni di marcatori Determinazione espressione antigenica più appropriata Determinazione della distribuzione delle catene leggere delle Ig

43 CD5 CD19 CD5 CD19 Determinazione selettiva delle catene leggere Ig mediante tripla marcatura sui linfociti CD19 positivi kappa R1 Gate CD19

44 CD5 CD19 kappa lambda Gate CD19
Determinazione selettiva delle catene leggere Ig mediante tripla marcatura sui linfociti CD19 positivi R1 Gate CD19 kappa lambda

45 ASSENZA MUTAZIONI GENI Ig
SINDROMI LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE IMMUNOFENOTIPO E PROGNOSI ESPRESSIONE CD38 > 30% ESPRESSIONE ZAP 70 > 20% ASSENZA MUTAZIONI GENI Ig RAPIDA PROGRESSIONE RIDOTTA SOPRAVVIVENZA

46 IMMUNOFENOTIPO IN EMATOLOGIA IMMUNOFENOTIPO E PROGNOSI
CD19 CD38 Espressione stabile correlata a malattia a intermedio-alto rischio Antigene a significato prognostico negativo Ematologia-Siena

47 COSA E’ ZAP-70?

48 IMMUNOFENOTIPO IN EMATOLOGIA IMMUNOFENOTIPO E PROGNOSI
ZAP-70 CD38 GUIPAUD, THE LANCET ONCOLOGY, 2003

49 R1 FSC SSC CD19 CD5 Ematologia-Siena

50 IMMUNOFENOTIPO IN EMATOLOGIA IMMUNOFENOTIPO E PROGNOSI
ZAP-70 CD38 GUIPAUD, THE LANCET ONCOLOGY, 2003

51 IMMUNOFENOTIPO IN EMATOLOGIA IMMUNOFENOTIPO E PROGNOSI
CD19 CD38 Espressione stabile correlata a malattia a intermedio-alto rischio Antigene a significato prognostico negativo Ematologia-Siena

52 SINDROMI LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE: IMMUNOFENOTIPO E PROGNOSI CICLINE

53 SINDROMI LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE: BIOPSIA LINFONODALE
AGOBIOPSIA BIOPSIA CHIRURGICA

54 SINDROMI LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE CRONICHEAGOBIOPSIA + FCM

55 SINDROMI LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE:
BIOPSIA CHIRURGICA MALTL MCL BCL -1 API2/MLT Marginal zone Germinal center Plasmacells Naive B cells Mantle BCL-6 Ig mutations ? CD5+ B-CLL/SLL Memory B cells BCL-2 PAX-5 Transformed DLCL p53 FL LPL p16

56 SINDROMI LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE: ASPIRATO E BIOPSIA MIDOLLARE
non essenziali per la diagnosi ma utili in caso di morfologia atipica (es. LLC se presenza di centri di proliferazione e assenza di foci paratrabecolari) Monitoraggio effetto terapeutico (MMR)

57 SINDROMI LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE: GENETICA
CITOGENETICA CONVENZIONALE FISH GENETICA MOLECOLARE GENOMICA PROTEOMICA

58 Incidenza di anomalie citogenetiche in pazienti con LLC
Anomalie citogenetiche si riscontrano in circa l’80% dei pazienti con LLC (FISH) Dohner et al, NEJM 2000

59 SINDROMI LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE:
GENETICA MOLECOLARE MALTL MCL BCL -1 API2/MLT Marginal zone Germinal center Plasmacells Naive B cells Mantle BCL-6 Ig mutations ? CD5+ B-CLL/SLL Memory B cells BCL-2 PAX-5 Transformed DLCL p53 FL LPL p16

60 SINDROMI LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE: GENOMICA

61 SINDROMI LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE: PROTEOMICA
IPERPLASIA REATTIVA LINFOMA B

62 SINDROMI LINFOPROLIFERATIVE CRONICHE CRITERI DIAGNOSTICI
MORFOLOGICI IMMUNOFENOTIPICI CITOGENETICI MOLECOLARI CLINICO-LABORATORISTICI