Escherichia coli O 157 :H 7 GRUPPO MALATTIA Diarrea neonatale; diarrea del viaggiatore Colite emorragica; sindrome emolitico - uremica Diarrea infantile.

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1 Escherichia coli O 157 :H 7 GRUPPO MALATTIA Diarrea neonatale; diarrea del viaggiatore Colite emorragica; sindrome emolitico - uremica Diarrea infantile Dissenteria Diarrea infantile ETEC EHEC EPEC EIEC EAEC Classificazione E. coli patogeni intestinali (LEVINE 1987)

2 1982 1987 1989-90 1993 Epidemie colite emorragica (OREGON, MICHIGAN) 1° segnalazione europea c.e. (BELGIO) 243 casi, acqua comunale (MISSOURI) 500 casi in 4 stati U.S.A., tritato “hamburger disease” E. coli O 157 :H 7 CENNI STORICI

3 Attività biochimico-enzimatiche POSITIVENEGATIVE glucosio - saccarosio - raffinosio ramnosio - arabinosio - melibiosio Indolo - LDC - ODC ONPG sorbitolo - inositolo - adonitolo malonato - urea - esculina H 2 S - ADH - TDA VP - citrato - ox Incapacità crescita ≥ 44,5°C Sorbitolo non fermentante Non produce β - glucuronidasi Batteriofago “AR1” E. coli O 157 :H 7 BIOLOGIA

4 ATTIVITÁ PATOGENAQUADRI PATOLOGICI Verotossine Colite emorragica Sindrome emolitico-uremica Terapia antibiotica : controindicata EPIDEMIOLOGIA D.M.I. = 0,3 - 15 coli/gr Serbatoio: bovini (suini,ovini,pollame) Trasmissione: alimentare, contagio interumano Segnalazioni: U.S.A., CANADA, GRAN BRETAGNA E. coli O 157 :H 7

5 VEROTOSSINA RICERCHE COLTURALI SIERODIAGNOSI E. coli O 157 :H 7 LABORATORIO

6 BRODI DI ARRICCHIMENTOT.S.B. mod. EC mod. TERRENI DI ISOLAMENTO SMA (MUG/BCIG) SD-39 FARMER DAVIS Terreno semisolido con sorbitolo e antisiero H 7 IDENTIF. BIOCHIM. ENZIMAT. API 20 E ORGANON TEKNICA (8) BAXTER D. (Micro-SCAM:22 ) IDENTIFICAZ. SIEROLOGICA Latex (OXOID; PRO-LAB) antisieri E. coli O 157 :H 7 SCREENING

7 AMPCORD DIPSTICK (Camdem, NJ) PETRIFILM TM IMMUNOFLUORESCENZA DIRETTA presuntivo Ag O 157 (Arricchim. Preliminare) bastoncini di plastica con Ab policlonali O 157 su membrane, marcati con particelle colloidali color oro POSITIVITÁ Comparsa di un color rosso-porpora Immunoblot Ag O 157 Campione + Br.arricchim. 37°C × 6-8h (agitazione) Piastre Petrifilm TM 42 °C × 18h Tecnica disc blot ELISA Anticorpi policlonali O 157 marcati con fluoresceina, utilizzati per la ricerca dell’antigene Anticorpi diretti Immunofluoresc. (Park et al.) A) B) Filtro epifluoresc. (3M St. Paul, MINN.) E. coli O 157 :H 7 METODICHE COLTURALI

8 ISO-GRID (QA Life Sc, San Diego CA) TEK TM ELISA (ORGANON TEKN., Durham NC) U.S.D.A. – F.S.I.S. PETRIFIL TM modif. (3M, St. Paul MINN) Qualitativo Quantitativo Presunt. ELISA (MAb) Conf. SMA – MUG Presunt. PETRIFILM TM Conf. SMA – BCIG 5ml alim. (1:10) Filtrare su HGMF Semina su Ag SD-39 44,5°C × 24h E.Coli O 157 :color rosa Altri coli: color verde CONFERMA -biochimica -sierologica Campione + TSB modif. 37°C × 16-18h (agitazione) Test sandwich ELISA 0,1ml SMA-MUG 37°C × 16-18h CONFERMA -Latex -API 20E -sieroagglutinazione Campione + Br.EC mod 25gr 225ml 37°C × 6-8h (agitazione) Dil. 10 -1 10 -2 tamp.fosf. Piastre TM 42 °C × 18h Lett.Pres.:colonie grigiastre su contesto nero CONFERMA: SMA-BCIG 42°C overnight -API 20E -sieroagglutinazione SENSIBILITÁ 2 coli / gr (carne) 10 coli / gr (altri) SENSIBILITÀ 0,2 coli / gr SENSIBILITÁ 0,7 coli / gr E. coli O 157 :H 7 METODICHE COLTURALI