Dottorato di Ricerca MEDICINA MATERNO INFANTILE, PEDIATRIA DELLO SVILUPPO E DELL’EDUCAZIONE, PERINATOLOGIA direttore: prof . A. Ventura Misura di allo-reattività.

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1 Dottorato di Ricerca MEDICINA MATERNO INFANTILE, PEDIATRIA DELLO SVILUPPO E DELL’EDUCAZIONE, PERINATOLOGIA direttore: prof . A. Ventura Misura di allo-reattività e studio in vitro di procedure di allo-deplezione per il trapianto di cellule staminali ematopoietiche Tutore Dr. Marco Rabusin Dottoranda Elisa Piscianz XXIV Ciclo – I Anno

2 Obiettivi dello studio
Trapianto di cellule staminali ematopoietiche (HSCT) Ricorso a donatori non compatibili (mismatched, aploidentici) Aumento della possibilità di trapianti, ma... GVHD Rischio infezioni Obiettivi dello studio Valutare la possibilità di controllare entrambi gli eventi con un’unica strategia integrata

3 Come… Mettendo a punto condizioni sensibili, specifiche, ripetibili e attuabili per test MLR per la selezione di linfociti alloreattivi (selective allodepletion) 1. Confronto di metodiche per misurare l’allo-reattività in vitro 2. Selezione e caratterizzazione delle cellule allo-reattive 3. Potenziamento/selezione della risposta anti-virale

4 1. Confronto di metodiche per misurare l’allo-reattività in vitro
Fibroblasti + IFN-gamma, irradiati + CD28 Monociti + GM-CSF/IL-4 Linfociti B attivati ed espansi Fb CD40L CD19+ 7gg: 3.8% 15 gg: 22.9% 21gg: 55.3% 28gg: 74.2% CD80+, HLA DR+ analisi citometrica IFN-gamma (o CD134) CD69, CD25, HLA DR a 24 ore proliferazione a 3 giorni (CFDA-SE) Immagino che tu lo dica a voce, ma aggiungerei due parole “espansione su fibroblasti transgenici per CD40L con aggiunta di IL-4”

5 1. Confronto di metodiche per misurare l’allo-reattività in vitro
IFN-gamma a 3 e a 10 ore Qui (e nella successiva) metterei un sottotitolo “MLR: linfociti di donatore contro B espansi”. (I punti senza B sono controlli).

6 1. Confronto di metodiche per misurare l’allo-reattività in vitro
Antigeni di attivazione a 24 ore CD25 HLA DR CD69

7 1. Confronto di metodiche per misurare l’allo-reattività in vitro
Proliferazione a 3 giorni

8 2. Selezione e caratterizzazione delle cellule allo-reattive
Selezione con biglie - IFN-gamma a 18 ore - CD134 a 2 giorni - CD25 e CD71 a 4 giorni Su coppie di donatori mismatched MLR Prima e dopo deplezione

9 possibilità di amplificare le cellule virus-specifiche
3. Potenziamento/selezione della risposta anti-virale possibilità di selezionare le cellule responder contro l’antigene pp65 del CMV (MacKinnon) possibilità di amplificare le cellule virus-specifiche