Percorso multimediale

Presentazione sul tema: "Percorso multimediale"— Transcript della presentazione:

1 Percorso multimediale
Il seguente documento illustra le tecniche per il rilievo ed il conteggio di indici microbiologici in acque minerali con la tecnica delle membrane filtranti. Le analisi sono condotte sia utilizzando terreni tradizionali che con l’impiego dei più recenti mezzi cromo-fluorogenici (one step).

2 Le ricerche descritte riguardano i seguenti parametri E
Le ricerche descritte riguardano i seguenti parametri E. Coli Enterococchi intestinali

3 E. Coli tecnica two steps
Parte prima E. Coli tecnica two steps

4 Dinamiche di crescita – AT7+TTC
Clicca per avviare l’animazione > 48 ore 24 ore 16 ore

5 Quale tradizionale terreno two steps è raffigurato nella foto?
AT7+TTC m-FC

6 NO Questo è m-FC

7 Isolamento su AT7+TTC Indica le colonie target
Non target TTC positiva Non target TTC positiva OK!!! Non target parziale inibizione Non target TTC negativa target target target

8 Il target in uscita è “coliformi fecali”.
AT7+TTC è un tradizionale terreno two steps, rileva fermentazione lattosio associata a termotolleranza. Il target in uscita è “coliformi fecali”. La normativa impone il rilievo di E. coli, quindi saranno necessarie prove di conferma

9 Procediamo che cosa prevede la prossima fase?
Clicca sull'immagine giusta Trapianto in BBVBL con incubazione a 37/44°C Semina in Mac Conkey agar NO OK

10 Clicca sull'immagine giusta
Il percorso di conferma adesso prevede: Sottocoltura in MCA Test biochimici NO OK

11 Nella prossima slide dovrai selezionare i test differenziali corretti

12 Test di conferma E. coli Test differenziali
Seleziona dal seguente elenco i test necessari Indolo OK!!! Catalasi Non necessario Ossidasi (negativo) OK!!! Ornitina decarbossilasi OK!!! Solfuro (positivo) NO!!! Solfuro (negativo) OK!!!

13 Ornitina decarbossilasi
Test differenziali SIM Ornitina decarbossilasi

14 Test differenziali Codifica numerica ENTEROTUBE II

15 E. Coli e coliformi totali
Tecnica one step procedi

16 I terreni one step per E. coli e coliformi totali
La foto mostra 2 colonie target b-GUD positive, e numerose colonie b-GAL positive quale terreno è rappresentato in figura? Chromatic DETECTION NO, su questo terreno non è rilevata la b-GUD ECX-GLUC NO questo terreno non rileva la b-GAL TBX NO questo terreno non rileva la b-GAL Chromagar ECC OK!!!

17 Dettagli Chromagar ECC selezionare le proprietà
differenziali Contiene un b-glucuronide (detector per b-GUD) OK!!! Contiene un b-galattoside (detector per b-GAL) OK!!! Fermentazione lattosio NO!!! selettive Violetto etile NO!!! Nella versione standard non è selettivo OK!!! Sali biliari n°3 NO!!!

18 I terreni one step per E. coli e coliformi totali
Clicca sul pulsante, visualizza le foto a luce naturale ed UV che mostrano 3 colonie target b-GAL positive e b-GUD positive, di quale terreno fluoro-cromogenico si tratta? Luce naturale/UV Chromagar ECC NO, su questo terreno i b-GUD sviluppano colonie blu-verde ed i b-GAL colonie color malva ECX-GLUC NO questo terreno non rileva la b-GAL C-EC agar OK!!! TBX NO questo terreno non rileva la b-GAL

19 I terreni one step per E. coli
La foto mostra 2 colonie target b-GUD positive, quale terreno è rappresentato in figura? Chromagar ORIENTATION NO, questo terreno non rileva la b-GUD M-FC NO, terreno two steps TBX OK!!!

20 I terreni one step per E. coli ECX-Gluc
La foto mostra varie colonie target, rispondi alle domande Quale attività enzimatica evidenziano? Sono b-GUD positive Quale colore mostrano le colonie target? Blu-verde Questo terreno permette di rilevare tutti gli E. coli? No, solo quelli tipici (b-GUD positivi) 94-97%

21 Conferme dirette INDOLO diretto su C-EC agar
INDOLO su tradizionale TW (in alto) e su ECX-Gluc (a dx) Visibile a sx il test eseguito su TBX (caratteristica non specifica per questo terreno)

22 Enterococchi intestinali tecnica two steps
Parte seconda Enterococchi intestinali tecnica two steps

23 Quale tradizionale terreno two steps è raffigurato nella foto
Quale tradizionale terreno two steps è raffigurato nella foto? Clicca sul tag giusto S&B KF BEA

24 NO Questo è S&B

25 NO Questo è BEA

26 Isolamento su KF Identifica le colonie target e non target
OK!!! TARGET TARGET TARGET NON TARGET NON TARGET NON TARGET NON TARGET

27 Isolamento su KF Indicare le colonie target
NON TARGET SUGGERIMENTO Le colonie gialle con centro arancio mostrano minore capacità di ridurre il TTC, tuttavia devono essere ritenute target

28 Dettagli KF selezionare le proprietà
differenziali Bile NO!!! Riduzione TTC OK!!! Fermentazione maltosio OK!!! selettive Sodio azide OK!!! Esculina NO!!! b-Glucuronidasi NO!!!

29 Conferme su BEA Conferma in piastra

30 Esempio di conferma diretta
Questo è BEA L’idrolisi dell’esculina è resa evidente mediante l’annerimento mostrato sul retro della piastra. Clicca sul pulsante per alternare la vista fronte /retro Fronte/retro

31 Conferma diretta altro esempio

32 Dettagli BEA selezionare le proprietà selettive
Sodio azide OK!!! Riduzione TTC NO!!! Fermentazione maltosio NO!!! Bile 40% OK!!! Idrolisi esculina NO!!! b-GAL NO!!!

33 Dettagli BEA selezionare le proprietà differenziali
Fermentazione maltosio NO!!! Bile 40% NO!!! b-GAL NO!!! Idrolisi esculina OK!!! Fermentazione lattosio NO!!! Riduzione TTC NO!!!

34 Il percorso di conferma adesso prevede:
Clicca sull'immagine giusta Test fisiologici Test sierologici NO OK

35 Test di conferma Enterococchi
Seleziona dal seguente elenco i test necessari Motilità SBAGLIATO Catalasi OK!!! Ossidasi SBAGLIATO Toll. 40% bile OK!!! Alotolleranza (BHI NaCl 6,5%) OK!!! Crescita a 45°C OK!!!

36 Alotolleranza (BHI NaCl 6,5%) Termoresistenza (BHI a 45°C 24/48 h
PYR Alotolleranza (BHI NaCl 6,5%) Termoresistenza (BHI a 45°C 24/48 h

37 Enterococchi intestinali
Tecnica one step procedi

38 E.C.O.A.GAR Enterococcus chromogenic Ottaviani & Agosti

39 E.C.O.A.GAR Enterococcus chromogenic Ottaviani & Agosti
La foto mostra varie tipologie di colonie, individua quelle target Rosa-rosso NO Bianco-grigio NO Turchese-azzurro OK!!!

40 Percorsi didattici alternativi
Il rilievo dei target E. coli, coliformi totali ed enterococchi intestinali può essere eseguito anche con altri terreni di ultima generazione. Tali mezzi, sebbene progettati per rilevare gli UTI (gli organismi responsabili di infezioni del tratto genito-urinario), sono utilizzati a scopo didattico per ricercare i suddetti target anche in matrici alimentari e nelle acque. Chromagar orientation Chromatic detection

41 Chromagar orientation
La foto mostra colonie target di E. coli, coliformi totali ed enterococchi intestinali. Individua le varie tipologie e verifica la tua risposta cliccando sui pulsanti corrispondenti E. coli Colonie rosa-rosso magenta Enterococchi Colonie turchese Coliformi totali Blu-blu metallico Altri Bianco-giallo

42 Chromagar orientation
Individua le colonie target Enterococchi Enterococchi Coliformi totali Coliformi totali E. coli Coliformi totali

43 Chromatic detection Clicca sulle immagini per una descrizione
Coliformi totali (in blu) e non target (bianche) Mix E. coli e coliformi totali Enterococchi

44 Chromatic detection dettagli

45 Grazie e buon lavoro Tutti i contenuti inclusi nella presentazione sono stati prodotti ed elaborati presso ITIS “G. Galilei “ Livorno dai docenti del gruppo disciplinare di biologia con il supporti degli studenti delle classi quinte BIO 2011