IL MISTERO DELLA GIOVANE DONNA MORTA D’INFARTO

Presentazione sul tema: "IL MISTERO DELLA GIOVANE DONNA MORTA D’INFARTO"— Transcript della presentazione:

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2 IL MISTERO DELLA GIOVANE DONNA MORTA D’INFARTO
Gruppo Biologia Molecolare

3 Autopsia: Giovane donna morta (30 anni circa).
Non presenta lesioni corporee. Nelle coronarie presenta trombosi che le ha procurato un infarto fulminante: necrosi del tessuto cardiaco muscolare.

4 Discussione del Caso: Fattori: - Obesità - Fumo
- Depressione post-parto - Assunzione di sonniferi - Morte sospetta della bisnonna

5 Il fattore V di Leiden:

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7 Estrazione del DNA dal sangue:
Separazione dei globuli bianchi dal resto del sangue. Rottura membrana cellulare (nucleare) tramite l’enzima proteasi. Aggiunta dell’Etanolo assoluto (anfipatico) Centrifugare e inserire i tamponi AW1 eAW2 Aggiunta H2O deionizzata

8 Amplificazione del DNA: la PCR
Perché amplifichiamo il DNA? Il DNA estratto nel passo precedente viene inserito in una soluzione contenente: - Mastermix (primers e nucleotidi) - Taq polimerasi (polimerizzazione) Il programma di amplificazione del DNA: - 94°C (denaturazione) - 60°C (annealing dei primers) -72°C (polimerizzazione)

9 Cicli PCR:

10 Digestione con enzimi di restrizione e separazione elettroforetica:
Dopo la polimerizzazione del DNA viene aggiunto l’enzima di restrizione. Scopo: tagliare i vari filamenti di DNA nei punti “specifici”. Il gene sano verrebbe tagliato in due punti specifici. Quando il paziente è affetto dal fattore V Leiden l’enzima di restrizione taglia solo in un punto il gene  Una base azotata è mutata

11 Analisi elettroforetica:
Perché eseguire l’analisi elettroforetica? Separare i pezzi del gene Il DNA, essendo carico negativamente, migra verso il polo positivo. Gel Agarosio: “rete” che ostacola i filamenti di DNA: Filamenti corti arrivano più vicino al polo + Filamenti lunghi si fermeranno più lontano al polo + rispetto ai filamenti corti

12 Possibili errori avvenuti durante l’analisi:
Taq-Polimerasi Primers Errore durante l’estrazione del DNA

13 Conclusioni: Donna affetta dal fattore V Leiden
Genitori saranno entrambi eterozigoti La figlia sarà sicuramente etrozigote, oppure addiruttura omozigote