LA DIMOSTRAZIONE CHE UNA SEQUENZA E’ UN SEGNALE PREVEDE ESPERIMENTI DI: 1. RIMOZIONE DELLA SEQUENZA 2. MUTAZIONE DELLA SEQUENZA 3. TRASFERIMENTO DELLA SEQUENZA SU UN’ALTRA PROTEINA

LE SEQUENZE SEGNALE DI LOCALIZZAZIONE NEL NUCLEO HANNO CARATTERISTICHE IN COMUNE PROTEINA ANTIGENE T (SV40) PROTEINA 72kDa (adenovirus) VP2/3 (polioma) 70kDa (drosophila) c-myc (pollo) SEQUENZA Pro-Lys-Lys-Lys-Arg-Lys-Val Pro-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Arg Gln-Lys-Lys-Lys-Arg-Lys-Leu Lys-Arg-Gly-Lys-Arg-Lys-Lys Glu-Gln-Lys-Arg-Arg-Arg-Arg

NLS 3. FREQUENTEMENTE BIPARTITE!! N UCLEAR L OCALIZATION S IGNALS 1. SEQUENZE RICCHE IN AA BASICI PKKKRKV 2. ALL’INTERNO DELLA PROTEINA! LE SEQUENZE SEGNALE DI LOCALIZZAZIONE NEL NUCLEO HANNO CARATTERISTICHE IN COMUNE

LE SEQUENZE SEGNALE VENGONO RICONOSCIUTE DA RECETTORI SPECIFICI: LE IMPORTINE

SI POSSONO INDIVIDUARE PIU’ TAPPE NEL TRASPORTO NUCLEARE 1. PROTEINE SOLUBILI (IMPORTINE) RICONOSCONO LE NLS 2. IL COMPLESSO IMPORTINE-PROTEINA NUCLEARE SI LEGA ALLE PROTEINE DEL PORO (NUP) (RIPETIZIONI FG) 3. IL PORO SI DILATA ED IL COMPLESSO LO ATTRAVERSA 4. L’IMPORTINA SI DISSOCIA DALLA PROTEINA NUCLEARE 5. L’IMPORTINA TORNA NEL CITOSOL

CITOSOL NUCLEO ILLUSTRAZIONE SEMPLIFICATA DEL PASSAGGIO DI PROTEINE ATTRAVERSO IL PORO NUCLEARE

RAN GTP RAN GDP GEF GAP Nel nucleo Nel citosol LA PROTEINA RAN E’ UN REGOLATORE CHIAVE DEL TRASPORTO DI PROTEINE NEL NUCLEO

nucleo citosol involucro nucleare proteina cargo NLS Ran RCC1 Ran GAP importina  importina 

ANCHE L’ESPORTAZIONE DI PROTEINE DAL NUCLEO RICHIEDE SEGNALI NES 3. PK1 e Rev (RICCHE DI LEUCINA) N UCLEAR E XPORT S IGNALS 1. hnRNP A1 (38 RESIDUI AMMINOACIDICI) 2. hnRNP K

IL TRASPORTO NUCLEO>CITOSOL SI SVOLGE MEDIANTE TAPPE SIMILI A QUELLE CITOSOL>NUCLEO 1. PROTEINE SOLUBILI (ESPORTINA) RICONOSCONO LE NES 2. IL COMPLESSO ESPORTINA-PROTEINA NUCLEARE SI LEGA AL PORO 3. IL COMPLESSO ATTRAVERSA IL PORO 4. L’ESPORTINA SI DISSOCIA DALLA PROTEINA NUCLEARE 5. L’ESPORTINA TORNA NEL NUCLEO

nucleo citosol involucro nucleare Ran GAP Ran cargo complesso cargo cargo esportina 

IL TRASPORTO ATTRAVERSO IL PORO E’ BIDIREZIONALE

NLS legame al DNA legame ormone involucro nucleare CITOSOL NUCLEO LE SEQUENZE SEGNALE POSSONO ESSERE MASCHERATE