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Struttura di un lavoro scientifico originale TITOLO RIASSUNTO (“ABSTRACT) INTRODUZIONE MATERIALI E METODI RISULTATI DISCUSSIONE BIBLIOGRAFIA (REFERENCES)

L’esperimento mira a stabilire dei rapporti causali A B C causa effetto meccanismo ESPERIMENTO ? A causa B C effetto ?

Results decreased proliferation but no erk inhibition in LCSC cells Gene profiling reveals increased glycolysis Reduced respiration by sorafenib Increased AMPK phosphorylation Synergistic effect of 2DG and SFB Effect on B16 in vivo; no big difference with 2DG

L’INIBITORE MULTICHINASICO SORAFENIB  INIBISCE Raf 1, BRAF wt E BRAF MUTATO  INIBISCE ALCUNI RTK S : VEGFR-2, VEGFR-3, PDGFR-   ATTIVITA’ ANTITUMORALE IN: TUMORE DEL COLON, MAMMELLA,CARCINOMA RENALE ED EPATOCARCINOMA

SORAFENIB: UN INIBITORE MULTICHINASICO

Modello sperimentale: cellule LCSC-2 (CSC epatiche?) Protocollo di cancerogenesi epatica APA 2AAFPH AFB 1 sacrifice 7 days 11 days different time points Piscaglia, et al. J Hepatol 2009

SFB riduce las proliferazione di cellule LCSC-2 ma non l’attivazione di ERK LCSCs-2 DMSO SORAFENIB 5  M / HGF /

Analisi microarray DMSOSORAFENIB

EFFETTI METABOLICI DEL SFB: INDUZIONE DELLA GLICOLISI GENENOMEFCFUNZIONE SLC2A3 (GLUT3) solute carrier family 2 (trasporto facilitato del glucosio), membro 3 Correlato alla glicolisi aerobia ENO2 enolase 2  2- fosfoglicerato  fosfoenolpiruv ato (glicolisi 7° step) PFKP phosphofructo kinase, platelet fruttosio 6- fosfato  fruttosio 1,6- difosfato (glicolisi 3° step) PDHA1 pyruvate dehydrogenas e (lipoamide) alpha 1 Enzima Mt (piruvato  Acetil CoA)

SFB riduce il consumo di ossigeno.... * * ATP INTRACELLULARE

...e la produzione di ATP CTRLSFB 2.5uM 2DG 15mM SFB+2DG NORMALIZED RLU

IL SFB FOSFORILA LA CHINASI AMPK P-AMPK actina blot: anti p-AMPK blot: anti actina Dmso SFB 5  M ATP ADP AMP AMP-K METABOLISMO  PROLIFERAZIONE SFB induce fosforilazione di AMP-K in cellule LCSC

Sinergismo tra SFB el’inibitore della glicolisi 2- deossi-glucosio (2DG) TOSSICITA’ CELLULARE

Effetto di SFB e della combinazione SFB+2DG “in vivo”