Analisi di espressione (mRNA) Northern Estensione del primer (primer extension) Protezione dalla S1/RNasi (mapping) RT-PCR (qRT-PCR o RT-qPCR) microarray
Analisi di espressione (proteine) Western Immunoprecipitazione Immunomicroscopia
Analisi di espressione (mRNA)
Indicazione di controllo traduzionale northern western A B A B mRNA X X actina mRNA actina
Estensione del primer (primer extension) mRNA totale Estensione del primer (primer extension) cap mRNA globina 3’ 5’ oligo antisenso marcato ibridazione estensione con RT Analisi dei frammenti estesi su gel di sequenza frammento protetto
Protezione da RNasi (RNase Protection) mRNA totale Protezione da RNasi (RNase Protection) cap mRNA globina 3’ 5’ sonda RNA antisenso ibridazione trattamento con RNasi Analisi dei frammenti protetti su gel di sequenza frammento protetto
PCR da mRNA (RT-PCR)
qRT-PCR (quantitative PCR)
Tecniche di analisi di interazione DNA(RNA)-Proteine Foot-printing EMSA (electrophoretic mobility shift assay) Chromatin immunoprecipitation (CHIP)
Analisi interazioni DNA-proteine: saggio di footprinting
Analisi interazioni DNA-proteine: saggio EMSA
Chromatin immunoprecipitation (Chip)
Sistemi (sperimentali) di espressione In vitro: - estratti cellulari In vivo: - cellule procariotiche - cellule eucariotiche in coltura - animali transgenici
Vettori di espressione
Vettore di espressione in cellule di mammifero
Proteine di fusione prom Tag o rep. cDNA term trascrizione traduzione
Trasformazione del lievito (Saccharomyces cerevisiae) diversi tipi di vettori vettori “navetta” batteri-lievito possibilità di ricombinazione omologa
Trasfezione di cellule in coltura transiente stabile vettori episomali vettori virali
Trasfezione in cellule in coltura
Vettori episomali
Metodi di trasfezione fosfato di calcio elettroporazione liposomi virus (SV40, retrovirus)
Topi transgenici