Il superavvolgimento negativo DNA superavvolto negativamente Il superavvolgimento negativo può convertirsi nella separazione locale dei due filamenti

separazione dei filamenti (denaturazione di regioni ricche in A+T) struttura Z (in corrispondenza di regioni di alternanza Pu/Py) strutture cruciformi (in corrispondenza di palindromi)

Superavvolgimento del DNA Positivo = DNA superspiralizzato Negativo = DNA sottospiralizzato

Enzimi che alterano la topologia del DNA Topoisomerasi: tipo I tipo II

Lewin, IL GENE VIII, Zanichelli editore S.p.A. Copyright © 2006

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Topoisomerasi

Enzimi che agiscono sugli acidi nucleici Polimerasi: DNA polimerasi RNA polimerasi Nucleasi: esonucleasi endonucleasi

Lewin, IL GENE VIII, Zanichelli editore S.p.A. Copyright © 2006

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Proprietà del DNA Appaiamento (associazione) Denaturazione Rinaturazione

Spettro di assorbimento del DNA 220 240 260 280 300 320 0.5 1.0 1.5 lunghezza d’onda (nm) Assorbanza effetto ipercromico

Fusione (melting) della doppia elica 70 80 90 100 T ( °C) Assorbanza relativa 1.0 1.1 1.2 1.3 1.4 Fusione (melting) della doppia elica e misura del Tm (Temperature of melting = Temperatura di fusione) Tm = 83°C

Dipendenza della denaturazione del DNA dal contenuto in G+C Tm (°C) G+C (moli %)

Fattori che influenzano la denaturazione Temperatura Forza ionica pH

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Riassociazione del DNA

Riassociazione del DNA

Appaiamento su filtro (ibridazione)

Sequenze palindromiche

Strutture a "forcina"

Struttura cruciforme

Strutture dell'RNA

Struttura "pseudonodo"

Mutazioni Una modificazione chimica di una base Incorporazione di una base sbagliata

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Il "Dogma centrale" Replicazione DNA Trascrizione inversa RNA Traduzione Replicazione DNA RNA Proteina inversa