=produzione di molte copie identiche del frammento di DNA Vettori e clonaggio Clonaggio di un frammento di DNA= =produzione di molte copie identiche del frammento di DNA

Il frammento di DNA viene inserito in una molecola-vettore Vettori e clonaggio Il frammento di DNA viene inserito in una molecola-vettore che può replicarsi quando è inserita in una cellula ospite, di solito un batterio

-Enzimi di restrizione -DNA ligasi -Vettori Vettori e clonaggio -Enzimi di restrizione -DNA ligasi -Vettori

Sistema di restrizione/metilazione Vettori e clonaggio Sistema di restrizione/metilazione del DNA

Frammenti di restrizione del DNA genomico di adenovirus 2 Vettori e clonaggio Frammenti di restrizione del DNA genomico di adenovirus 2

Vettori e clonaggio Reazione ligasica di frammenti di restrizione

Vettori e clonaggio Vettori Plasmidi Fagi Cosmidi YAC BAC

Molecola circolare di DNA a doppio filamento, normalmente presente Vettori e clonaggio Plasmide Molecola circolare di DNA a doppio filamento, normalmente presente nella cellula batterica, in grado di replicarsi autonomamente dal cromosoma.

Vettori e clonaggio

Replicazione di un plasmide Vettori e clonaggio Replicazione di un plasmide

Vettori e clonaggio Clonaggio di un frammento di DNA in un plasmide

Vettori e clonaggio Formazione di un plasmide ricombinante

Il marker di selezione permette permette di selezionare le Vettori e clonaggio Il marker di selezione permette permette di selezionare le cellule batteriche contenenti il plasmide

Clonaggio in un plasmide e selezione su un terreno contenente Vettori e clonaggio Clonaggio in un plasmide e selezione su un terreno contenente un antibiotico

La possibilità di selezionare i batteri trasformati è molto Vettori e clonaggio La possibilità di selezionare i batteri trasformati è molto importante perché la trasformazione batterica è un processo poco efficiente

Clonaggio di diversi frammenti di DNA in un plasmide Vettori e clonaggio Clonaggio di diversi frammenti di DNA in un plasmide

Regione di clonaggio (=polylinker): regione che contiene una copia di Vettori e clonaggio Regione di clonaggio (=polylinker): regione che contiene una copia di diversi siti di restrizione

Vettori e clonaggio

DNA clonabile in un plasmide: Vettori e clonaggio Lunghezza massima del DNA clonabile in un plasmide: circa 20 Kb

I virus sono piccoli parassiti non in grado di replicarsi. Vettori e clonaggio I virus sono piccoli parassiti non in grado di replicarsi. Dopo aver infettato una cellula-ospite utilizzano i suoi sistemi di replicazione e sintesi delle proteine per riprodursi

I batteriofagi (o fagi) sono virus che infettano i batteri. Vettori e clonaggio I batteriofagi (o fagi) sono virus che infettano i batteri.

Vettori e clonaggio Ciclo litico del fago T4

Il fago più utilizzato in biologia Vettori e clonaggio Il fago più utilizzato in biologia molecolare è il fago 

Vettori e clonaggio Ciclo litico e lisogenico del fago 

Vettori e clonaggio Assemblaggio di un fago 

Mappa del genoma del fago  Vettori e clonaggio Mappa del genoma del fago 

Vettori e clonaggio Clonaggio di frammenti di DNA nel fago 

Formazione di cloni fagici Vettori e clonaggio Formazione di cloni fagici

L’infezione dei batteri con il fago  è circa 103 volte più efficiente Vettori e clonaggio L’infezione dei batteri con il fago  è circa 103 volte più efficiente della trasformazione con un plasmide

Lunghezza del DNA clonabile in un fago: 20-25 Kb Vettori e clonaggio Lunghezza del DNA clonabile in un fago: 20-25 Kb

Un cosmide è un plasmide contenente la sequenza COS Vettori e clonaggio Un cosmide è un plasmide contenente la sequenza COS dal fago 

Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio Clonaggio di frammenti di DNA in un cosmide

clonabile in un cosmide: Vettori e clonaggio Lunghezza del DNA clonabile in un cosmide: circa 45 Kb

YAC=yeast artificial chromosome Vettori e clonaggio YAC=yeast artificial chromosome

Dimostrazione sperimentale degli elementi funzionali di un cromosoma Vettori e clonaggio Dimostrazione sperimentale degli elementi funzionali di un cromosoma

Vettori e clonaggio Vettore YAC: sequenze ARS CEN TEL

Vettori e clonaggio

Lunghezza del DNA clonabile in uno YAC: fino a 1000 Kb Vettori e clonaggio Lunghezza del DNA clonabile in uno YAC: fino a 1000 Kb

Approximate Maximum Length of DNA That Can Be Cloned in Vectors Vettori e clonaggio Approximate Maximum Length of DNA That Can Be Cloned in Vectors Vector Type Cloned DNA (kb) Plasmid 20 λ phage 25 Cosmid 45 P1 phage 100 BAC (bacterial artificial chromosome) 300 YAC (yeast artificial chromosome) 1000

Vettore di espressione Vettori e clonaggio Vettore di espressione

Vettori e clonaggio