Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I Conferenza di Denver 1-3 gruppo A 4-5 gruppo B 1966 X-6-12 gruppo C 13-15 gruppo D 16-18 gruppo E 19-20 gruppo F Y-21-22 gruppo G by GP&NA

Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I Cariotipi a confronto 1-3 gruppo A 4-5 gruppo B X-6-12 gruppo C 13-15 gruppo D 16-18 gruppo E 19-20 gruppo F Y-21-22 gruppo G by GP&NA

Metodi colorazione differenziale Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I Metodi colorazione differenziale Colorano una regione specifica di alcuni o di tutti i cromosomi C-bande : tutti i centromeri e le regioni eterocromatiche variabili dei cromosomi 1,9,16,Y Creano un’alternanza di bande chiare e scure lungo l’asse del cromosoma specifica per ogni coppia di omologhi. by GP&NA

Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I QM-banding pattern utilizzando la mostarda di quinacrina...... by GP&NA

Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I DAPI e QM by GP&NA

Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I G-bande by GP&NA

Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I R-bande by GP&NA

Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I Diagramma by GP&NA

Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I Terminologia 46,XX - cariotipo normale Femminile 46,XY - cariotipo normale Maschile Questo modo di scrivere ci da’ due informazioni: numero totale dei cromosomi (46) sesso dell’organismo 47,XY,+21 Maschio con 47 cromosomi (invece di 46) ed un cromosoma 21 in piu’ (sindrome di Down) 46,XX,del(14)(q23) del=delezione 46,XY,dup(14)(q22q25) dup= duplicazione 46,XX,r(7)(p22q36) r=ring (cromosoma ad anello) by GP&NA

Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I FISH sintesi di una sonda complementare marcata con un fluorocromo cromosoma sul vetrino A T C G A T C G denaturazione doppia elica di DNA A T C G ibridazione della sonda sui cromosomi denaturati sul vetrino A T C G osservazione del vetrino A T C G denaturazione A T C G T A G C by GP&NA

FISH : microscopio a fluorescenza Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I FISH : microscopio a fluorescenza Osservazione al microscopio fotografia filtro di emissione CCD camera Lampada a vapori di mercurio specchio dicroico filtro di eccitazione Elaborazione al computer obiettivo/ condensatore by GP&NA

Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I FISH: metafase in DAPI Cromosomi 1. denaturati 2. colorati con DAPI by GP&NA

Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I FISH: segnali by GP&NA

Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I FISH: merge by GP&NA

Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I Analisi del cariotipo 1) Allestimento della coltura 2) Preparazione dei vetrini 3) Colorazione del preparato con colorazioni differenziali di routine 4) Osservazione al microscopio, selezione delle metafasi e acquisizione delle immagini by GP&NA

Allestimento del preparato Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I Allestimento del preparato fitoemoagglutinina (stimola la crescita) colchicina (ultimi 30’) Ipotonica (20’) sangue periferico terreno di coltura 48-96h proliferazione centrifugazione centrifugazione pellet risospeso fissativo fissativo risospensione in poco fissativo allestimento del preparato pellet risospeso centrifugazioni (2-3) by GP&NA

Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I Analisi del cariotipo 1) Allestimento della coltura 2) Preparazione dei vetrini 3) Colorazione del preparato con colorazioni differenziali di routine 4) Osservazione al microscopio, selezione delle metafasi e acquisizione delle immagini by GP&NA

Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I Colorazione QM 3) Colorazione del preparato con colorazioni differenziali di routine Fluorocromi: QM, DAPI. Necessario un microscopio a flurescenza by GP&NA

Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I Colorazione Giemsa 3) Colorazione del preparato con colorazioni differenziali di routine G-banding con Giemsa dopo trattamento con tripsina by GP&NA

Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I Analisi del cariotipo 1) Allestimento della coltura 2) Preparazione dei vetrini 3) Colorazione del preparato con colorazioni differenziali di routine 4) Osservazione al microscopio, selezione delle metafasi e acquisizione delle immagini by GP&NA

Selezione delle metafasi Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I Selezione delle metafasi Ottima ma….. by GP&NA

Selezione delle metafasi Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I Selezione delle metafasi Puo’ essere anche cosi’.. Cromosomi non ben riconoscibili, difficili anche da contare. Scartare! (potendo) by GP&NA

Selezione delle metafasi Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I Selezione delle metafasi .. O cosi’ Troppo contratti pero’ si puo’ usare per contarli. Scartare! (potendo) by GP&NA

Selezione delle metafasi Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I Selezione delle metafasi Sufficiente Si possono contare Puo’ essere utile per analizzare i cromosomi non sovrapposti by GP&NA

Selezione delle metafasi Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I Selezione delle metafasi Discreta Si possono contare, e anche se ci sono alcune sovrapposizioni, si possono analizzare by GP&NA

Selezione delle metafasi Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I Selezione delle metafasi Buona Si possono contare, e anche se ci sono alcune sovrapposizioni, la morfologia dei cromosomi e’ buona by GP&NA

Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I Come si fa il cariotipo? 1. SI CONTANO I CROMOSOMI : IMPORTANTE PER SOSPETTARE LA PRESENZA DI ALTERAZIONI NEL NUMERO CROMOSOMICO 2. SI APPAIANO GLI OMOLOGHI PER SIMILARITA’ 3. SI METTONO IN ORDINE SECONDO LA CONVENZIONE by GP&NA

Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I Fare il cariotipo 46 10 9 11 16 by GP&NA

Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari Sc.Biosanitarie Genetica I Cariotipo ordinato CARIOTIPO IN QM (specifico il bandeggio) by GP&NA