MEN 2 (AD) MEN 2A: 95% carcinoma midollare della tiroide 50% feocromocitoma 15-30% iperparatiroidismo (iperplasia, adenoma) raramente lichen amiloidosico interscapolare malatia di Hirschsprung nervi corneali prominenti

MEN 2 MEN 2A - 1 : MTC + pheo + HPT MEN 2A - 2 : MTC + pheo MEN 2A - 3 : MTC + HPT FMTC : almeno 4-8 casi di MTC in famiglia parenti affetti viventi con sorveglianza clinica negativa per pheo e HPT MEN 2B : insorgenza precoce di MTC con o senza pheo dismorfismi facciali, neuromi delle mucose (labbra) habitus marfanoide, cifoscoliosi ganglioneuromatosi intestinale pectus excavatum, pes cavus

MEN2 MEN1 VHL SDHB-C-D Iperplasia paratiroidi Carcinoma Midollare della Tiroide Iperplasia paratiroidi Tumori endocrini pancreatici Adenoma ipofisi gastrinomi duodenali carcinoidi ecc. MEN1 feocromocitoma PGLs Angiomatosi retinica Emangioblastoma SNC Carcinoma renale (CC) VHL SDHB-C-D

gene MEN2 recettore RET RET: recettore tirosino-chinasico di membrana mappatura nel 1986 sul cromosoma 10, quindi in 10q11.2 identificazione delle mutazioni germinali RET nel 1993 21 esoni distribuiti in una regione di circa 60 kb RET: recettore tirosino-chinasico di membrana espresso dai derivati delle creste neurali, paratiroidi, rene embrionale, SNC 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21

proto-oncogene RET (10q11.2) RTK (receptor tyrosine kinase) Ligandi : fattori neurotrofici della famiglia del transforming growth factor b : GDNF, Neurturina, Persefina, Artemina cadherine-like cys-rich region trans-membrane tyrosine kinase domain 3 isoforms: - 1072 (ex 19) - 1114 (ex 20) - 1106 (ex 21) Co-recettori : Proteine legate al glicosil-fosfatidil-inositolo GFRa1, GFRa2, GFRa3, GFRa4

Mutazioni “germinali” in proto-oncogeni RET : neoplasie endocrine multiple tipo 2 MET : carcinoma renale ereditario papillare KIT- PDGFRa : GIST (gastro-intestinal stromal tumors) famigliari “Key features” : - predisposizioni al cancro AD - pattern limitato di espressione dei geni - origine dei tumori dalle cellule che li esprimono - possible presenza di difetti di sviluppo

2% del genoma codificante Protein chinasi (~520) : 2% del genoma codificante 385 serina-treonina chinasi 90 tirosina-chinasi -> 58 RTKs 43 tirosina-chinasi like

Mutations Polymophisms Gly533 1597 GGC Cys TGC Lys603 1807 AAA Gln CAA Asp631 1891 GAC Tyr TAC Cys634 1900 TGC all detectable by digestion Glu768 2302 GAG Asp GAT, GAC dig. AluI Asn777 2331 AAC Ser AGC Leu790 2368 TTG Phe TTT, TTC Tyr791 2371 TAT Phe TTT Val804 2410 GTG Leu CTG Met ATG Arg844 2530 CGG Leu CTG Ala883 2647 GCT Phe TTT dig. DdeI Ser891 2671 TCG Ala GCG dig. BstuI Met918 2752 ATG Thr ACG dig. NaeI ex 8 ex 10 Ile647 (ATC>ATT) Gly691Ser (GGT>AGT) BanI ex 11 Leu769 (CTT>CTG) TaqI ex 13 Ser836 (AGC/AGT) AluI ex 14 Ser904 (TCC>TCG) RsaI ex 15 ex 16

Mutazioni RET extra-cellulari (livello di rischio 2, 3) Cys609 # Cys611 Cys618 # Cys620 # 12 bp dup (634-635) Cys630 Cys634 MEN2A-1: 8% MEN2A-2: 31% MEN2A-3: 20% FMTC : 60 % HSCR: 65 cases ex 10 ex 11 cys-rich region trans-membrane MEN2A-1: 92% MEN2A-2: 69% MEN2A-3: 80% FMTC : 30 % tyrosine kinase domain Effetto biologico : dimerizzazione ligando-indipendente del recettore RET

RET: Cys634Tyr Cys634Arg Cys634Tyr Neg mut wt RET exon 11

RET: Cys634Tyr + wt

RET: Cys634Tyr

stesso luogo di origine RET: Cys634Tyr stesso luogo di origine mut mut mut

RET: Cys634Tyr 40 individui analizzati: 5 affetti al momento del test 14 portatori asintomatici 21 non portatori 9 tiroidectomie dopo test

RET: Cys618Ser wt wt wt wt wt wt wt wt wt wt

RET: Cys618Arg wt wt wt wt wt wt wt wt wt wt

wt

Mutazioni RET in Cys esone 10 : MEN2A-FMTC e malattia di Hirschsprung 23 famiglie 65 cases

Mutazioni RET intra-cellulari Livello di rischio 1 (MEN2B) Effetto biologico: cambiamento della specificità di substrato trans- membrane Livello di rischio 3 (FMTC) (raramente MEN2A) ATP binding domain Glu768 Asp Leu790 Phe Tyr791 Phe Val804 Leu, Met Arg844 Leu Ala883 Phe Ser891 Ala Met918 Thr ex 13 inter-TK ex 14 ex 15 Catalytic core pocket ex 16

RET: Val804Met CT al test genetico basale : 2.60 pg/ml wt mut CT al test genetico basale : 2.60 pg/ml picco : 18.20 pg/ml CT al test genetico basale : 10.36 pg/ml picco : 215.36 pg/ml

RET: Glu798Asp mut wt RET exon 13 Glu768Asp CTT/CTG Leu769 WT Breast Cancer 58 mut wt Glu768Asp CTT/CTG Leu769 WT RET exon 13

mut RET: Leu790Phe Calcitoninemia 9.7 pg/ml

RET: Leu790Phe