Attivazione e deplezione selettiva di linfociti antigene-specifici Dottorato di Ricerca in MEDICINA MATERNO INFANTILE, PEDIATRIA DELLO SVILUPPO E DELL’EDUCAZIONE, PERINATOLOGIA direttore: prof . A. Ventura Attivazione e deplezione selettiva di linfociti antigene-specifici Tutore Dr. Marco Rabusin Dottoranda Elisa Piscianz XXIV Ciclo

Trapianto di cellule staminali emopoietiche (HSCT) Ag virali altri Ag cellule staminali cellule del donatore GvT cellule tumorali cellule infettate GvI GvHD cellule del ricevente trapianto attecchimento cellule target ricevente

Obiettivi dello studio Mettere a punto un metodo per identificare e depletare i linfociti T allo-reattivi Identificare le condizioni migliori per: attivazione delle cellule Ag-specifiche inibizione o killing delle cellule attivate entro 48-72 ore risparmiare le cellule resting

Mixed Leukocyte Reaction (MLR) linfociti responder cellule stimolatrici cellule allo-geniche da donatore dal ricevente farmaci LCL-EBV cellule dendritiche allo-deplezione specifica Analisi: vitalità: 7AAD proliferazione: 3H-Thy, CFSE

Farmaci Folate methabolism inhibition Methotrexate (Genestier L, J Clinical Investigation, 1998) JAK pathway inhibition Tasocitinib (Manshouri T, Cancer Science, 2008) Membrane electron transport inhibition Phenoxodiol (Herst PM, Haematologica, 2009) GSH depletion 3-HAA (Lee SM, Immunology Letters, 2010) Proteasome inhibition Bortezomib (Blanco B, Blood, 2006)

Screening dei farmaci killing cellule attivate tossicità cellule resting 3-HAA metabolita Trp (IDO enzyme) deplezione GSH associazione con MnCl2 (Hiramatsu R, J Cellular Biochemistry, 2008) Bortezomib inibitore del proteosoma compromette via IFk – NF-kB

3-HAA e MnCl2 stimolazione con LCL-EBV deplezione con 3-HAA/MnCl2 60 ore vitalità: 7AAD proliferazione: 3H-Thy Piscianz et al, Int. Immunopharmacol. 2011

3-HAA, MnCl2, Bortezomib stimolazione con LCL-EBV deplezione con 3-HAA/MnCl2/Bortezomib 60 ore vitalità: 7AAD proliferazione: 3H-Thy Piscianz et al, Int. Immunopharmacol. 2011

Stimolazione con DCs e deplezione con farmaci non stimolato non stimolato + 3-HAA/MnCl2 PHA PHA + 3-HAA/MnCl2 MLR MLR + 3-HAA/MnCl2

Test di re-stimolazione stimolazione con DCs deplezione con 3-HAA/MnCl2 60 ore re-stimolazione (DCs 1st e DC 3rd) 60 ore vitalità : 7AAD proliferazione: CFSE

Conclusioni e prossimo futuro… metodo attuabile somministrazione/associazione dei farmaci modulabile emivita dei farmaci dopo deplezione risposta a patogeni Treg