METODO ENZIMATICO DI SANGER Vengono allestite delle reazioni di PCR particolari con un singolo primer e in ciascuna delle quali è presente un reagente in più: DIDEOSSINUCLEOTIDE Quando la DNApolimerasi incorpora nel nuovo filamento un dideossinucleotide la sintesi si blocca TERMINATORI
Per ogni posizione in alcune nuove molecole si inserisce un deossinucleotide la sintesi del filamento continua In altre molecole si inserisce un dideossinucleotide la sintesi del filamento si blocca In ogni tubo di reazione si possono formare diversi possibili frammenti:
SEQUENZIAMENTO AUTOMATICO TRAMITE BIGDYE TERMINATOR KIT si usano dideossinucleotidi coniugati a composti a composti fluorescenti la separazione dei frammenti e la lettura della sequenza vengono fatte automaticamente SEQUENZIATORE AUTOMATICO