LE PROTEINE SONO SOSTANZE ANFOTERICHE:

Presentazione sul tema: "LE PROTEINE SONO SOSTANZE ANFOTERICHE:"— Transcript della presentazione:

1 LE PROTEINE SONO SOSTANZE ANFOTERICHE:
la loro carica elettrica netta cambia in funzione del pH Grazie a questa caratteristica possono essere separate con tecniche elettroforetiche in base a: mobilità elettroforetica punto isoelettrico massa molecolare

2 Elettroforesi delle sieroproteine:
ELETTROFORESI ZONALE Sotto l’influenza di un campo elettrico le proteine, che a pH alcalino hanno carica elettrica netta negativa, migreranno con una velocità proporzionale al rapporto massa/carica dal catodo verso l’anodo. I supporti solidi possono essere: Acetato di cellulosa Gel di agarosio Gel di poliacrilamide Le proteine vengono rivelate con l’uso di coloranti specifici quali: Rosso Ponceau Nero d’Amido Blu di Comassie Violetto HR Oro colloidale pH alcalino e costante

3 IDENTIFICAZIONE DELLE MC: ELETTROFORESI CAPILLARE
La separazione avviene in fase liquida a 24°C per 5min a 8000 V. le proteine migrano in base alla carica elettrica e alla ripartizione cromatografica sulle pareti del capillare. La rivelazione avviene senza ausilio di coloranti tramite misura dell’assorbanza a 214 nm da parte un detector UV posto alla fine del capillare.

4 ELETTROFORESI ZONALE su Acetato di cellulosa
Elettroforesi delle sieroproteine: ELETTROFORESI ZONALE su Acetato di cellulosa

5 Elettroforesi delle sieroproteine: ELETTROFORESI Capillare

6

7 Bisalbuminemia

8

9

10

11

12 Immunoglobulina intatta
MONOCLONALE BICLONALE TRICLONALE POLICLONALE Immunoglobulina intatta Catena Leggera Ig intatta + Catena Leggera Catena Pesante Un clone può andare incontro ad uno switching di classe e produrre due o più classi di Catene Pesanti, ma ogni clone produrrà solo catene k o l mai entrambe

13 POLICLONALE MONOCLONALE Le Ig monoclonali si possono distinguere dalle policlonali grazie alla loro uniforme mobilità elettroforetica.

14

15 IDENTIFICAZIONE DELLE MC:
ELETTROFORESI ZONALE

16 Elettroforesi Capillare
Acetato di Cellulosa

17 Elettroforesi Capillare
Acetato di Cellulosa

18 Elettroforesi Capillare
Acetato di Cellulosa

19 Elettroforesi Capillare
? Acetato di cellulosa

20 Elettroforesi Capillare
? Acetato di Cellulosa

21 TIPIZZAZIONE DELLE MC:
IMMUNOFISSAZIONE Elettroforesi con Ab specifico Incubazione Lavaggi Policlonale G A M k l Monoclonale G A M k l Colorazione

22 TIPIZZAZIONE DELLE MC: IMMUNOFISSAZIONE
MC: IgG Kappa G A M k l G A M k l MC: IgG Lambda in quadro oligoclonale

23 TIPIZZAZIONE DELLE MC: IMMUNOFISSAZIONE
M k l MC: IgM Lambda ? G A M k l MC: Catene Lambda libere

24 TIPIZZAZIONE DELLE MC: IMMUNOFISSAZIONE
G A M k l D E MC: IgA Kappa + Kappa libere

25 Gammopatie Monoclonali: casistica della Mayo Clinic anno 2001 n=1068
MGUS 62% Amiloidosi 8% MM 16% Linfoproliferative 3% Altro 4% MW SMM Gammopatie Monoclonali: casistica della Mayo Clinic anno 2001 n=1068 Kyle RA et al. Rev.Clin.Exper Med 63: ,2002

26 Prevalenza della MGUS Studio di popolazione
Popolazione: Abitanti > 50aa Olmsted County (MIN) Metodo: Elettroforesi su agarosio IFE su agarosio dei campioni positivi o sospetti per CM Prevalenza totale : 3.2% Kyle RA et al. Prevalence of Monoclonal Gammopathy of Undetermined SIgnificance N Eng J Med, 354(13): , 2006