METODI MULTIRESIDUO PER PESTICIDI SU ALIMENTI DI ORIGINE VEGETALE CON CLEAN UP IN FASE DISPERSA Dott. Alessandro Sassolini.

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1 METODI MULTIRESIDUO PER PESTICIDI SU ALIMENTI DI ORIGINE VEGETALE CON CLEAN UP IN FASE DISPERSA
Dott. Alessandro Sassolini

2 I prodotti fitosanitari sono i preparati contenenti una o più sostanze attive destinati a:
Proteggere i vegetali o i prodotti vegetali dagli organismi nocivi o prevenirne gli effetti; Favorire o regolare i processi vitali dei vegetali, con esclusione dei fertilizzanti; Conservare i prodotti vegetali, con esclusione dei conservanti; Eliminare le piante indesiderate; Eliminare parti di vegetali, frenare o evitare un loro indesiderato accrescimento

3 Classificazione in base al bersaglio: Insetticidi Anticrittogamici Erbicidi Diserbanti Acaricidi Topicidi

4 Classificazione Meccanismi di tossicità Ad esempio: Carbammati e fosforati Agiscono su sistema nervoso

5 Classificazione sulla struttura chimica
Chlortoluron Acido 2,4 Diclorofenossiacetico Malathion

6 Più di 300 composti in Db ISPRA 2009
1114 composti in Db PAN 2007 1400 composti in Db CRA REGOLAMENTO (CE) N. 149/2008 cita centinaia di composti LMR a 0.01 mg/Kg e il lod richiesto dalla SANCO è di 1µg/Kg Classe molto eterogenea un metodo per tutti non c’è ….

7 STRUMENTAZIONE metodi analitici basati su detector specifici sono limitati a poche decine di composti L’uso di MSD è obbligato

8 METODI CLASSICI

9 Verdure e frutta con SPE
Campione: 10 g di spinaci spiked con 0.2 ppm ogni pesticida. Estrarre con 10 mL di acetonitrile, portato poi a 1 mL Condizionamento SPE tube 5 mL acetonitrile:toluene(3:1) Caricare l’estratto e eluire 20 mL acetonitrile:toluene(3:1) Evaporare l’eluito fino a secchezza con N2 at 40 °C Ricostruire in 1 mL acetone : esano (1:1, v/v)

10 Oli con SPE Pesare 4 g olio Aggiungere esano fino a 7 mL Caricare su colonnina SPE Extrelut NT3 Eluire con 3 x 5 mL acetonitrile Raccogliere gli eluati e evaporare Riprendere con 1 mL isottano e aggiungere Std interno

11 Tecniche dSPE o QuEChERS ( si pronuncia come Catchers )
Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged, Safe Anastassiedes , Lehotay J.AOAC (2003)

12 TIPOLOGIE DI ALIMENTI Frutta Verdura Farine Spezie Frutta secca (noci, …) Oli Miele Nei lavori classici non adatti ai vini, succhi di frutta ma …

13 Step 1: omogeneizzazione
Addizione eventuale STD di processo

14 Regolazione percentuale acqua
Deve essere > 80%

15 Step 2: 1° clean up QuEChERS
15 gr campione 15 mL acetonitrile 6 gr MgSO4 1.5 gr NaCl

16 Effetto pH sui recuperi: tampone citrato consigliato

17 Step 3: 2° clean up QuEChERS
Fase organica da step 2 1.8 MgSO4 0.3 PSA

18 Step 4 : Prelevare 1 mL Scambio solvente Addizione std interno

19 Campioni con elevate % di grassi
Step QuEChERS: 5gr campione + 10 mL acetonitrile (cere e grassi) Overnight 2) Prelevo 1 mL surnatante e metto in vial 0.05 gr PSA, 0.05 gr C18, gr MgSO4 3) Prelevo 0.5 mL, aggiungo Std interno e effettuo analisi GC-MS

20 Nel caso di elevate concentrazioni di carotenoidi e clorofilla (spezie, rucola, …)
GCB

21 Cromatogramma TIC standard 58 analiti

22 Cromatogramma TIC recupero

23 Dati medi su 5 repliche Diazinon 84% Pirimicarb 86% Clorpyrifos metile 81%

24 PRO Preparativa più rapida Preparativa più semplice e più difficile da sbagliare Preparativa più economica Uso di solventi ecologicamente compatibili CONTRO Non è un deus ex machina. I metodi vanno adattati alla matrice Si inietta un campione più sporco. Aumenta manutenzione Il risparmio dei tempi è minore di quanto si possa pensare I processi non coinvolti nei clean up e non parallelizzabili limitano il risparmio

25 ASPETTI DELLA ANALISI STRUMENTALE
Large volume injection con PTV Analyte protectants. 3-ethoxy-1,2-propandiol (3-O-ethylglycerol) Sorbitol

26 ASPETTI DELLA ANALISI STRUMENTALE
Triplo quadrupolo (MS2) Circa 100 migliore S/N Meno vulnerabile alle matrici sporche Approccio estremo - Direct Sample Introduction Lehotay Journal AOAC (2000)

27 Ulteriori sviluppi: QuEChERS per fitosanitari su matrici alimentari particolari QuEChERS su altri analiti (PCB) Esempio: The in polvere

28 Application note Thermo:
3 clean up QuEChERS 1 step di concentrazione e scambio solvente È ancora QuEChERS ??

29 QuEChERS vino

30 SITOGRAFIA Sito QuEChERS Journal of separation science Journal of Chromatography A e B Journal AOAC Application Notes Supelco, Restek, Thermo