Costanti di ionizzazione

MODALITA’ DI PREPARAZIONE DI SOLUZIONI TAMPONE

d (densità) = g /mlg =d x ml M = n moli/L soluzione n moli = g / PM g PM x L soluzione M = M x PM x L soluzioneg = d x ml PM x L soluzione M = M x PM x L soluzione d ml = x PM x L soluzione g = g PM x L soluzione x PM x L soluzione x ml g ml = g PM x L soluzione

Esempio: Calcolare il pH di una soluzione tampone che contiene CH 3 COOH 0,10M e CH 3 COONa 0,20M. Il K a dell’acido acetico è 1.7x10 -5 In soluzione acquosa il sale acetato di sodio dissocia CH 3 COONa(s)  CH 3 COO - (aq) + Na + (aq) per cui la soluzione è 0.20M in CH 3 COO - (la base) Applicando l’equazione di Henderson-Hasselbach si ha: Il pK a dell’acido acetico è: log 2pH= log4.77 COOH][CH ]COO[CH logpKpH 3 3 a   

Esempio: Calcolare il rapporto fra la concentrazione di acido acetico e di ione acetato necessari per preparare una soluzione tampone con pH 4,9. Il pK a dell’acido acetico è 4,77 Ad esempio se in un litro di soluzione mettiamo 1,0 moli di acido acetico, dobbiamo aggiungere 1,35 moli di acetato di sodio Applicando l’equazione di Henderson-Hasselbach si ha:

Per preparare 100ml di soluzione: Per ogni ml di acido acetico si devono usare 1,35 ml di acetato di sodio per un totale di 2,35 ml Volendo preparare una soluzione di 100ml: 1ml di CH 3 COOH : 2,35 ml tot =x ml di CH 3 COOH : x 1/ 2,35 = 42,6 ml di CH 3 COOH e 57,4 ml di CH 3 COO - (che è il complemento a 100) Ad esempio se in un litro di soluzione mettiamo 1,0 moli di acido acetico, dobbiamo aggiungere 1,35 moli di acetato di sodio

Determinazione della concentrazione proteica mediante BLU COOMASSIE Il blu coomassie è un colorante che quando si lega alle proteine cambia colore da marrone a blu La quantità di colorante che si lega è proporzionale alla quantità di proteina presente L’intensità del colore blu è proporzionale alla concentrazione di proteina

1 mg/ml2 mg/ml4 mg/ml8 mg/ml16 mg/ml COSTRUZIONE DI UNA RETTA DI TARATURA  Proteina a concentrazione nota (BSA)  Colorante (Bradford)

Camp.H 2 0 µl µl BSA µg BSA Bradford µl Abs 595 nmM  µg/ml Bianco ,4230,4530, ,5980,6390,6190, ,680,6840,6820, ,7960,8110,8040, ,0010,9981,0000,562 [BSA]= 0.1 mg/ml= …………µg/ml=………µg/µl

Abs 595 nm

Camp.H 2 0 µl Camp. µl Bradford µlAbs 595 nmM  µg/ml Bianco500 0,4230,4530, ,5980,6390,6190, ,680,6840,6820, ,7960,8110,8040, ,0010,9981,0000,562 carico …. rifiutato …. eluato ….