Metodi istologici

Cellule coltivate in vitro o del sangue possono essere osservate direttamente al microscopio dopo asciugamento con o senza colorazione

L’osservazione istologica

Tipi di coloranti Coloranti basici: es. ematossilina (affinità per molecole acide come il DNA). Coloranti acidi: es. eosina (affinità per molecole basiche come le proteine citoplasmatiche). Sono coloranti aspecifici

Ematossilina-eosina è la colorazione più comune Ematossilina eosina (EE) = l’ematossilina basica si lega a molecole acide conferendo colore blu violaceo; utilizzato per il nucleo L’eosina acida colora le sostanze basiche in rosso o rosa; utilizzata per il citoplasma (ricco di proteine basiche) e per le fibre collagene.

La colorazione GIEMSA è la più utilizzata per il sangue Giemsa & Wright = utilizzato per gli elementi del sangue e di altre cellule in striscio. Colora i nuclei di blu scuro o violetto (dal blu di metilene), il citoplasma di blu chiaro, (dal blu di metilene), e gli eritrociti di rosa pallido (dall’eosina).

Colorazioni istochimiche Le colorazioni istochimiche danno informazioni, più che sull’aspetto morfologico del preparato, sul contenuto e sulla natura delle sostanze chimiche contenute nei tessuti biologici esaminati. Si eseguono quindi una o più reazioni chimiche, stechiometricamente esatte e specifiche, che mettono in evidenza un determinato gruppo funzionale o un particolare ione, presenti nei vari tessuti e nelle cellule che li compongono. Di solito si eseguono “batterie di reazioni” in modo da avere, oltre al dato morfologico, più risposte che, alla fine, dovranno essere univoche e incontrovertibili. I precipitati colorati così ottenuti saranno evidenti al microscopio ottico o, nel caso si tratti di fluorocromi, al microscopio a fluorescenza.

Colorazioni specifiche individuano alcuni componenti della cellula e dei tessuti in maniera specifica. Esempi sono: PAS (acido periodico-reattivo di Schiff) (colora i carboidrati) Sudan nero o III (arancione) (lipidi) Reazione di Feulgen mette in evidenza il DNA con un colore magenta.

Fegato colorato con il metodo PAS con citoplasma rosa per la presenza del glicogeno

Sono colorazioni specifiche per determinati tipi di tessuti Colorazioni elettive Sono colorazioni specifiche per determinati tipi di tessuti

Impregnazione argentica

metacromasia Proprietà che hanno alcuni composti chimici di assumere un colore diverso da quello del colorante. Es il blu di toluidina conferisce un colore rosso violetto alla cartilagine. Questo accade con sostanze di alto peso molecolare come i GAG

GAG Ripetizione di unità disaccaridiche formate da zuccheri che contengono un gruppo aminico I GAG si legano a proteine per formare i proteoglicani