Citogenetica I La citogenetica e` lo studio dei fenomeni genetici attraverso l’analisi citologica dei cromosomi al microscopio. Ferguson-Smith By NA

Cariotipi a confronto 1-3 gruppo A 4-5 gruppo B X-6-12 gruppo C 13-15 gruppo D 16-18 gruppo E 19-20 gruppo F Y-21-22 gruppo G By NA

G-bande By NA

Selezione delle metafasi Ottima ma….. By NA

Selezione delle metafasi Puo’ essere anche cosi’... Cromosomi non ben riconoscibili, difficili anche da contare. Scartare! (potendo) By NA

Selezione delle metafasi .. O cosi’ Troppo contratti pero’ si puo’ usare per contarli. Scartare! (potendo) By NA

Selezione delle metafasi Sufficiente Si possono contare Puo’ essere utile per analizzare i cromosomi non sovrapposti By NA

Selezione delle metafasi Discreta Si possono contare, e anche se ci sono alcune sovrapposizioni, si possono analizzare By NA

Selezione delle metafasi Buona Si possono contare, e anche se ci sono alcune sovrapposizioni, la morfologia dei cromosomi e’ buona By NA

Come si fa il cariotipo? 1. SI CONTANO I CROMOSOMI : IMPORTANTE PER SOSPETTARE LA PRESENZA DI ALTERAZIONI NEL NUMERO CROMOSOMICO 2. SI APPAIANO GLI OMOLOGHI PER SIMILARITA’ 3. SI METTONO IN ORDINE SECONDO LA CONVENZIONE By NA

Fare il cariotipo 46 10 9 11 16 By NA

Cariotipo ordinato CARIOTIPO IN QM (indicare il bandeggio) By NA

Diagramma By NA

Diagramma By NA

Terminologia 46,XX - cariotipo normale Femminile 46,XY - cariotipo normale Maschile Questo modo di scrivere ci da’ due informazioni: numero totale dei cromosomi (46) sesso dell’organismo 47,XY,+21 Maschio con 47 cromosomi (invece di 46) ed un cromosoma 21 in piu’ (sindrome di Down) 46,XX,del(14)(q23) del=delezione 46,XY,dup(14)(q22q25) dup= duplicazione 46,XX,r(7)(p22q36) r=ring (cromosoma ad anello) By NA

FISH By NA

FISH sintesi di una sonda complementare marcata con un fluorocromo cromosoma sul vetrino A T C G A T C G denaturazione doppia elica di DNA A T C G ibridazione della sonda sui cromosomi denaturati sul vetrino A T C G osservazione del vetrino A T C G denaturazione A T C G T A G C By NA

Principio della fluorescenza By NA

FISH : microscopio a fluorescenza Osservazione al microscopio fotografia filtro di emissione CCD camera Lampada a vapori di mercurio specchio dicroico filtro di eccitazione Elaborazione al computer obiettivo/ condensatore By NA

FISH: metafase in DAPI Cromosomi 1. denaturati 2. colorati con DAPI By NA

FISH: segnali Sonde puntiformi fluorescenti By NA

FISH: merge Sovrapposizione dell’immagine della sonda sull’immagine del DAPI By NA

SONDE PER FISH By NA

DAPI WCP MERGE SONDA By NA

DAPI MERGE PCP SONDA By NA

COIBRIDAZIONI 3 SONDE PUNTIFORMI 2 SONDE PUNTIFORMI By NA

Duplicazione braccio corto del cromosoma Y Yp duplicato crom Y normale Alfoide crom Y SRY 46X -Y + mar(dupYp) Individuo di sesso maschile azospermico By NA

Inversione pericentrica:4(inv) liquido amniotico 4 inv(4) By NA

Traslocazione 1/15 in diagnosi prenatale 1 1/15 15/1 15 46,XY,der(1)t(1;15)(1pter,15q23)mat ishder(1)t(1p;15q)(p36.33;q24.2)mat (pcp1p36;pcp15q) Prelievo di villi coriali Sangue periferico madre By NA

Traslocazione(3/22) 3 3/22 22/3 22 By NA

Traslocazione 5/11 Sangue periferico padre Liquido amniotico By NA

Traslocazione 5/11 5 5/11 11/5 11 By NA

insinv6/7 6 6del 7/6 y By NA

isocromosoma 21 21 isodic21 By NA