Antibiogrammi: principio ed esecuzione Divulgazione Presentazione per divulgazione   PRESENTAZIONE Antibiogrammi: principio ed esecuzione Presentazione per divulgazione in microbiologia nell’ottica di collaborazioni a scopo didattico per le Scuole Medie Superiori. © TIBIO Sagl 2009 © TIBIO Sagl 2009 Versione per presentazione 05.04.2017

Divulgazione  L’antibiogramma: Principio: prova di sensibilità (standardizzata) in vitro o in vivo di una specie o di una comunità batterica, ad uno o più prodotti antibiotici. Specie isolate; Comunità isolate; Materiale biologico; Viene osservata e testata la RESISTENZA o la SENSIBILITÀ all’antibiotico. Antibiotico: sostanza di varia natura chimica prodotta da microorganismi, quali muffe o batteri, o per sintesi, con potere battericida o batteriostatico.  Prodotto anche da piante o animali (p.es. olii essenziali dei vegetali). Standardizzata: purezza del ceppo, densità, incubazione, metodo di lettura, interpretazione del risultato 05.04.2017

RESISTENZA all’antibiotico: La capacità di proliferazione ed il potere patogeno dei batteri non è influenzato dall’antibiotico (alle concentrazioni testate): l’antibiotico è inutile a fini terapeutici. SENSIBILITÀ all’antibiotico: La capacità di proliferazione e/o il potere patogeno dei batteri è influenzato dall’antibiotico (alle concentrazioni testate): l’antibiotico è utile a fini terapeutici. L’effetto può essere (in funzione di molecola e concentrazione): Battericida: l’antibiotico uccide le cellule batteriche. Batteriostatico: l’antibiotico inibisce la crescita batterica. 05.04.2017

L’antibiogramma: METODI: Divulgazione  L’antibiogramma: METODI: Metodo per diluizioni successive: valutare la sensibilità batterica ad un antibiotico a concentrazioni decrescenti (per MIC o MBC). 10 mg/ml 1 mg/ml 0.1 mg/ml 0.01 mg/ml 0.001 mg/ml 05.04.2017 Figure da: www.servier.ch Servier Medical Art

L’antibiogramma: METODI: Divulgazione  L’antibiogramma: METODI: Etest: test epsilometrico: prova di sensibilità su terreno solido mediante inserzione di strisce di carta bibula contenenti concentrazioni scalari di antibiotico. 10 mg/ml 0.001 mg/ml 05.04.2017 Figure da: www.servier.ch Servier Medical Art

L’antibiogramma: METODI: Divulgazione  L’antibiogramma: METODI: Metodo per diffusione: prova di sensibilità su terreno solido inoculato (Müller-Hinton agar). Per tutti i batteri di interesse medico (salvo specie esigenti). Per testare uno o più antibiotici. 10 mg/ml A 1 mg/ml B Agar: estratto di carne, caseina, amido, agar 0.1 mg/ml C BIANCO D 05.04.2017 Figure da: www.servier.ch Servier Medical Art

104 / ml 105 / ml METODO PER DIFFUSIONE Divulgazione METODO PER DIFFUSIONE Protocollo da applicare (previsto per l’attività didattica del LiLu2 con la FASV, Olivone 2009) Ceppo batterico: Enterococchi Ceppo SF68 (BIOFLORIN ® ). Preparazione del ceppo batterico (diluizioni scalari): Preparazione del liquido LB (Luria Broth) e diluizioni. 50 mio / capsula  106 / ml 105 / ml 104 / ml Metodo di Bauer e Kirby 05.04.2017 Figure da: www.servier.ch Servier Medical Art

METODO PER DIFFUSIONE Protocollo da applicare (previsto per l’attività didattica del LiLu2 con la FASV, Olivone 2009) Preparazione delle capsule: Terreno solido (agar) di Müller-Hinton Agar II: 15 ml / capsula (omogeneo!) EBOLLIZIONE 05.04.2017 Figure da: www.servier.ch Servier Medical Art

METODO PER DIFFUSIONE Protocollo da applicare (previsto per l’attività didattica del LiLu2 con la FASV, Olivone 2009) Antibiogramma (1): Inoculo in ogni capsula di 100µl di LB con 104 cellule / ml (1) 104 ¢ / ml 05.04.2017 Figure da: www.servier.ch Servier Medical Art

METODO PER DIFFUSIONE Protocollo da applicare (previsto per l’attività didattica del LiLu2 con la FASV, Olivone 2009) Antibiogramma (2): Inoculo in ogni capsula di 100µl di LB con 104 cellule / ml (2) 05.04.2017 Figure da: www.servier.ch Servier Medical Art

METODO PER DIFFUSIONE Protocollo da applicare (previsto per l’attività didattica del LiLu2 con la FASV, Olivone 2009) Antibiogramma (2): Inoculo in ogni capsula di 100µl di LB con 104 cellule / ml (2) 05.04.2017 Figure da: www.servier.ch Servier Medical Art

METODO PER DIFFUSIONE Protocollo da applicare (previsto per l’attività didattica del LiLu2 con la FASV, Olivone 2009) Antibiogramma (2): Inoculo in ogni capsula di 100µl di LB con 104 cellule / ml (2) 05.04.2017 Figure da: www.servier.ch Servier Medical Art

METODO PER DIFFUSIONE Protocollo da applicare (previsto per l’attività didattica del LiLu2 con la FASV, Olivone 2009) Antibiogramma (3): Introdurre i dischi di carta imbevuti di olio essenziale e il controllo. 15 µl di olio essenziale Ø 6 mm 15 µl di H2O Ø 6 mm CONTROLLO 05.04.2017 Figure da: www.servier.ch Servier Medical Art

METODO PER DIFFUSIONE Protocollo da applicare (previsto per l’attività didattica del LiLu2 con la FASV Olivone 2009) Antibiogramma: Introdurre i dischi di carta imbevuti di olio essenziale e il controllo. 15 µl di olio essenziale 15 µl di H2O 05.04.2017 Figure da: www.servier.ch Servier Medical Art

METODO PER DIFFUSIONE Protocollo da applicare (previsto per l’attività didattica del LiLu2 con la FASV, Olivone 2009) Antibiogramma (4): Incubazione a 37°C per 24 ore. 05.04.2017 Figure da: www.servier.ch Servier Medical Art

METODO PER DIFFUSIONE Protocollo da applicare (previsto per l’attività didattica del LiLu2 con la FASV, Olivone 2009) Antibiogramma (5): Misurazione dell’anello di inibizione. 15 µl di olio essenziale 15 µl di H2O 05.04.2017 Figure da: www.servier.ch Servier Medical Art

METODO PER DIFFUSIONE Confronto degli aloni di inibizione, considerare: Peso molecolare della molecola di antibiotico: più leggera  più diffusione. Idrofobicità della molecola di antibiotico: l’agar è a base di acqua. Confronto possibile solo tra molecole simili! Confronto e risultati (protocollo standard): Alone di ø 1 – 9 mm: specie resistente. Alone di ø10 – 18 mm: specie con resistenza intermedia. Alone di ø > 19 mm: specie sensibile. 05.04.2017 Figure da: www.servier.ch Servier Medical Art

Grazie per l’attenzione FINE PRESENTAZIONE Grazie per l’attenzione 05.04.2017