ESTRAZIONE del DNA

SCOPO: MATERIALI e STRUMENTI: Estrazione e visione del DNA da una banana. MATERIALI e STRUMENTI: Detersivo per piatti (Svelto) azione contro i grassi rompe la membrana nucleare; Succo d’ananas enzima bromelina rompe i legami e libera il DNA dagli istoni che lo impacchettano; NaCl; Alcool etilico raffreddato (concentrazione 100%) DNA insolubile in alcool Bacchetta di vetro; Una provetta; Colino; Spatola; pestello; 2 becher; Cilindro graduato; Una banana (perché tanto DNA e pratica).

CENNI TEORICI:

FASE 1 PROCEDIMENTO: Sbucciato e pesato la banana (80 g). Inserita nel becher e pestata per distruggere la Parete cellulare (in modo meccanico), come si può osservare nella figura 1. Figura 1: mousse di banana

FASE 2 PROCEDIMENTO: Formare una soluzione per estrarre il DNA della banana inserendo nel cilindro graduato 3 grammi di NaCl, 10 ml di detersivo e acqua deionizzata dalla spruzzetta fino a raggiungere 100 ml di soluzione, cercando di non creare schiuma, come si può vedere nella figura 2. figura 2 : soluzione ottenuta

FASE 3 PROCEDIMENTO: Versare il composto nel becher dove si trova la mousse di banana e lasciarlo agire, continuare a mescolare, per circa 8 minuti fino ad ottenere una soluzione. Il protocollo più corretto sarebbe stato quello di portare il tutto alla temperatura costante di 50-60 °C per circa 15 minuti e subito dopo inserirla nel ghiaccio. Per accelerare e favorire il processo e per inibire/disattivare certi enzimi (quali la DNasi)che potrebbero degradare/intaccare il DNA. Dopo parecchio tempo a quella temperatura il DNA comincia a degradarsi ugualmente, frammentandosi. per impedire il degrado del DNA

FASE 4 PROCEDIMENTO: Filtrare 50 ml di soluzione con il colino nell’altro becher di vetro. Prelevare 20 ml di filtrato e aggiungervi 5 ml di succo d’ananas, lasciandolo agire per circa 4 minuti, come si può osservare nella figura 3. Con questa operazione, raccogliamo un liquido ricco di DNA, separandolo dai residui cellulari e dagli altri tessuti del frutto che verranno scartati. Figura 3: mousse di banana filtrata

FASE 5 PROCEDIMENTO: Versare circa un terzo della soluzione nella provetta e aggiungere lo stesso volume di alcool etilico raffreddato, lasciare riposare per consentire al DNA di precipitare e di raccogliersi. OSSERVAZIONI: abbiamo notato la formazione di due livelli. L’alcool etilico si disponeva sopra e sotto la soluzione acquosa per la diversa densità. Nel mezzo di essi si può osservare una massa gelatinosa che è il DNA. Esso figura di colore bianchiccio assomigliando ad una ragnatela come di può vedere in figura.

Figura 1 : DNA prelevato dalla banana

CONCLUSIONI Con ciò abbiamo verificato la facilità nell’estrarre il DNA da cellule vegetali. Il DNA ha un colore bianchiccio, è insolubile in alcool, nel quale precipita e si rende visibile. Ciò fa capire come è importante la struttura della cellula.