RICONOSCIMENTO DEL DOLORE Reazioni riconducibili ad un dolore primario risposte protettive; fuga vocalizzazione Reazioni ad un danno duraturo alterazioni dell’attività e/o della coordinazione motoria modifiche motivazionali

INDICATORI DI STATI DI SOFFERENZA changes in body weight (and related changes in food and water intake); external physical appearance; measurable clinical signs (e.g., changes in heart rate, in respiratory rate, and in their nature); changes in unprovoked behavior; behavioral responses to external stimuli.

ANESTESIA Lo scopo dell’anestesia consiste nel prevenire la percezione degli stimoli dolorosi senza indurre una indebita depressione delle funzioni fisiologiche

FASI E PIANI DELL’ANESTESIA GENERALE INDUZIONE ECCITAZIONE ANESTESIA CHIRURGICA Piano 1: perdita del riflesso palpebrale Piano 2: assenza di movimenti oculari; respirazione regolare e profonda Piano 3: paralisi dei muscoli intercostali FASE IPOSSICO-TOSSICA

CRITERI PER IL MONITORAGGIO DELLA PROFONDITÀ DELL’ANESTESIA RIFLESSI Riflesso di raddrizzamento Riflesso di deglutizione (riflesso laringeo) Riflesso palpebrale Riflesso podale Riflesso pupillare Riflesso corneale

CONTROLLO DELLE FUNZIONI VITALI ECG e ritmo cardiaco gittata cardiaca pressione arteriosa e venosa e pressione nell’arteria polmonare capnogramma stato dei gas disciolti nel sangue e stato acido-base saturazione arteriosa di ossigeno volume respiratorio e frequenza pressione nelle vie respiratorie temperatura corporea EEG

ANESTESIA Depressione dei centri respiratori Ventilazione forzata Ipotermia Mantenimento della temperatura corporea Cautela nella manipolazione dell’animale Digiuno Anticolinergici (atropina; glicopirrolato)

Tranquillanti e sedativi ANESTESIA Tranquillanti e sedativi Fenotiazine (promazina; acepromazina) Benzodiazepine (diazepam; midazolam) Butirrofenoni (azaperone; droperidolo) Agonisti 2-adrenergici (xilazina; detomidina; medetomidina

ANESTESIA Anestetici generali anestetici dissociativi (chetamina; tiletamina) barbiturici cloralosio uretano (etilcarbammato) tribromoetanolo (avertina) Antagonisti aspecifici iniettabili yohimbina 4-aminopiridina (4AP) doxapram

ANESTESIA Anestetici inalatori a base di etere (etere dietilico; metossiflurano; enflurano; isoflurano) idrocarburi alogenati (alotano) altri (protossido di azoto)

Camera per anestesia

ANESTESIA Miorilascianti: gliceril guiacolato Bloccanti neuromuscolari: Depolarizzanti (succinilcolina Non depolarizzanti (curaro, pancuronio, gallamina, atacurio e vecuronio Anestetici locali e regionali: (lidocaina, procaina, bupivacaina e tetracaina)

PARENTERAL ANESTHESIA OF MICE Agent Dose Duration of surgical anesthesia Pentobarbital 50 mg/kg IP 20-40 minutes Tribromoethanol (avertin) 240 mg/kg IP30 15-45 minutes Metomidate/fentanyl 60 mg/kg + 0.06 mg/kg SQ29 20-30 minutes Ketamine/xylazine 80-100 mg/kg + 10 mg/kg IP29

PARENTERAL ANESTHESIA OF RATS Agent Dose Onset Duration Pentobarbital 30 mg/kg IP 19 5 90 minutes 40 mg/kg IP 19 120 minutes Ketamine-xylazine 40 mg/kg; 5 mg/kg IP19 80 minutes 60 mg/kg; 7.5 mg/kg19 2 115 minutes Ketamine-medetomidine 75 mg/kg; 0.5 mg/kg29 20-30 minutes

Criteri per una morte “umana” EUTANASIA Criteri per una morte “umana” La morte deve sopraggiungere senza segni di panico, dolore o stress minimo intervallo di tempo di coscienza affidabilità e riproducibilità sicurezza per il personale implicato nella procedura minimi effetti fisici e/o psicologici indesiderati sull’animale compatibilità con i requisiti e gli scopi dello studio scientifico scarsi o nulli effetti emotivi sull’osservatore e sull’operatore minimo impatto ambientale ed ecologico strumentazione meccanica semplice e di facile manutenzione locale adibito alla procedura separato dai locali in cui soggiornano gli animali

Meccanismi con cui viene indotta la morte EUTANASIA Meccanismi con cui viene indotta la morte IPOSSIA DEPRESSIONE DIRETTA DELL’ATTIVITÀ NEURONALE COMPROMISSIONE DELL’ATTIVITÀ NEURONALE MEDIANTE METODI FISICI

EUTANASIA Metodi fisici concussione dislocazione cervicale decapitazione shock elettrico microonde dissanguamento

Agenti farmacologici non inalatori EUTANASIA Agenti farmacologici non inalatori barbiturici T-61 (TANAX) cloralio idrato chetamina cloridrato magnesio solfato

EUTANASIA Anestetici inalatori etere alotano metossiflurano isoflurano enflurano protossido di azoto

EUTANASIA Gas non anestetici monossido di carbonio azoto argon anidride carbonica cianuro di potassio

EUTANASIA Method of euthanasia Rabbits/Rodents <125gm Rabbits/Rodents >125 gm and < 1 kg Carbon dioxide Method of choice Barbiturate overdose (iv) Barbiturate overdose (ip) Anesthetic overdose Exsanguination in anesthetized animal Other acceptable method KCL (iv) in anesthetized animal Not recommended due to technical difficulty Decapitation in sedated or anesthetized animal Cervical dislocation in anesthetized or sedated animal Decapitation in awake animal Acceptable only with scientific justification Cervical dislocation in awake animal Stunning in an awake animal Unacceptable method of euthanasia

EUTANASIA Method of euthanasia Rabbits/Rodents > 1 kg but < 5 kg Dogs and Cats Carbon dioxide Other acceptable method Unacceptable method of euthanasia Barbiturate overdose (iv) Method of choice Barbiturate overdose (ip) Anesthetic overdose Exsanguination in anesthetized animal KCL (iv) in anesthetized animal Decapitation in sedated or anesthetized animal Acceptable only with scientific justification Cervical dislocation in anesthetized or sedated animal Decapitation in awake animal Cervical dislocation in awake animal Stunning in an awake animal

EUTANASIA Method of euthanasia Non-Human Primates Carbon dioxide Unacceptable method of euthanasia Barbiturate overdose (iv) Method of choice Barbiturate overdose (ip) Anesthetic overdose Exsanguination in anesthetized animal Other acceptable method KCL (iv) in anesthetized animal Decapitation in sedated or anesthetized animal Cervical dislocation in anesthetized or sedated animal Decapitation in awake animal Cervical dislocation in awake animal Stunning in an awake animal

EUTANASIA Species IV route (mg/kg) IP route (mg/kg) Mouse 150 Rat Barbiturate euthanizing doses (mg/kg): EUTANASIA Barbiturate euthanizing doses (mg/kg): Species IV route (mg/kg) IP route (mg/kg) Mouse 150 Rat Rabbit 100 Guinea Pig 120 Hamster Sheep 90 Goat Chicken Cat 80 Dog Swine Ferret 12035 Primate 80