Diagnosi Prenatale II By NA

CROMOSOMI MARCATORI (Extra Structurally Abnormal Chromosome) Cromosomi di cui non è riconoscibile con le metodiche classiche la provenienza Frequenza alla nascita 0.14-0.72/1000 Difficile correlazione genotipo-fenotipo in diagnosi prenatale Importante il rilievo della caratterizzazione molecolare By NA

CROMOSOMI MARCATORI (Extra Structurally Abnormal Chromosome) In più del 50% dei casi è oggi possibile fare previsioni fenotipiche corrette: Invdup15 (50% ESAC) Cromosomi sessuali By NA

CROMOSOMI MARCATORI (Extra Structurally Abnormal Chromosome) Amniocentesi paziente di 41 aa Presenza di un ESAC in tutti i cloni de novo piccole dimensioni By NA

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CROMOSOMI MARCATORI (Extra Structurally Abnormal Chromosome) CBG positivo DA/DAPI positivo FISH centromero 15 positiva Invdup(15) Definizione del tipo By NA

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CROMOSOMI MARCATORI (Extra Structurally Abnormal Chromosome) FISH sonde pericentromeriche (D15S11; GABR3) NEGATIVA Invdup(15) tipo I Assenza di anomalie del fenotipo By NA

CROMOSOMI MARCATORI (Extra Structurally Abnormal Chromosome) Rischio di Disomia Uniparentale 15q11-q13 da origine postzigotica del marcatore Materna Paterna s. Prader/Willi s. Angelman By NA

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Polimorfismi Cromosoma 15 - Tecnica PAGE P F M P F M D15S130 D15S165 Polimorfismi Cromosoma 15 - Tecnica PAGE By NA

CROMOSOMI MARCATORI (Extra Structurally Abnormal Chromosome) ESCLUSIONE DISOMIA UNIPARENTALE CON MARCATORI POLIMORFICI DEL CROMOSOMA 15 By NA

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CROMOSOMI MARCATORI (Extra Structurally Abnormal Chromosome) Amniocentesi paziente di 35 aa Presenza di un ESAC de novo piccole dimensioni By NA

CROMOSOMI MARCATORI (Extra Structurally Abnormal Chromosome) CBG positivo DA/DAPI negativo FISH 13,14,15,21,22,X,Y negativa Rischio alterazioni fenotipiche 5% Ecografia/Ecocardiografia Riduzione rischio di 1/3 By NA

CROMOSOMI MARCATORI (Extra Structurally Abnormal Chromosome) Paziente in gravidanza di 31 aa  Riscontro ecografico NT aumentata By NA

Toshiba Instruments By NA

CROMOSOMI MARCATORI (Extra Structurally Abnormal Chromosome) NT aumentata   rischio aneuploidie Prelievo villi coriali a 11 settimane Presenza di ESAC de novo piccole dimensioni, bisatellitato By NA

CROMOSOMI MARCATORI (Extra Structurally Abnormal Chromosome) FISH 13,14,15,21,22  Positiva per centromero 22 invdup(22) Cat/Eye syndrome By NA

Cat Eye syndrome Malf. orecchio 86% Malf.anorettali 81% Malf. urogenitali 71% Coloboma occhio 61% Altre Malformazioni By NA

Cat Eye syndrome Malformazioni cardiache 62% di cui 1/3 Anomalie del Ritorno Venoso Polmonare By NA

Cat Eye syndrome RITARDO MENTALE ?? Severo 7% Moderato/lieve 47% By NA

Cat Eye syndrome Assenza di correlazioni tra estensione/regioni geniche presenti nel cromosoma invdup(22) ed anomalie del fenotipo By NA

Cat Eye syndrome CES Tipo I vs CES Tipo II non ha utilità dal punto di vista clinico By NA

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Amniocentesi  cellule dall’epiblasto della massa cellulare interna. Mosaicismo Amniocentesi  cellule dall’epiblasto della massa cellulare interna. Villocentesi – Coltura a breve termine  cellule del trofoblasto. Villocentesi – Coltura a lungo termine  cellule dello stroma (mesoderma extraembrionario). By NA

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I Livello: singola cellula MOSAICISMO I Livello: singola cellula II Livello: due o più cellule in una flask con la stessa anomalia o singolo clone III Livello: due o più cellule in più flask con la stessa anomalia o almeno 2 cloni By NA

Liquido Amniotico Mosaicismi Livello I  2.5-7 % Livello II  0.7-1.1 % Livello III  < 0.2 % By NA

MOSAICISMO PSEUDOMOSAICISMO MOSAICISMO CONFINATO ALLA PLACENTA (chorion, amnion) MOSAICISMO VERO La grande maggioranza dei mosaicismi in diagnosi prenatale non si correla ad anomalie fenotipiche fetali By NA

Indicazione: familiarità s. Down Mosaicismo trisomia 11 Paziente di 29 anni Indicazione: familiarità s. Down  Cariotipo fetale 46,XX (10 cloni)/47,XX,+11 (1 clone) Mosaicismo II livello By NA

Linee Guida work-up Moderato: altre 10 cellule dalla flask con anomalia oppure altri 12 cloni. Cr. Sessuale sovra-numerario (SC,MC) Trisomia 1,2,3,4,5,6,7, 10,11,16,17,19 (SC, MC) 45,X - Monosomie (MC) Alt. bilanciate (MC) Marcatore (SC) In situ Cr. Sessuale sovra-numerario (SCo,MCo) Trisomia 1,2,3,4,5,6,7, 10,11,16,17,19 (SCo, MCo) 45,X - Monosomie (SCo, MCo) Alt. bilanciate (MCo) Marcatore (SCo) By NA

Estensione analisi a 41 cloni  Cariotipo Mosaicismo trisomia 11 Estensione analisi a 41 cloni  Cariotipo 46,XY (39 cloni)/47,XY,+11 (2 cloni) Mosaicismo III livello By NA

Liquido Amniotico Mosaicismi - Livello III Conferma sino al 40 % alla cordocentesi ed al 50%(autosomi), 80% (ESAC) e 90% (cr. sessuali) al follow-up Tipo di Cromosoma (es. ESAC) Utilizzo e limiti della Cordocentesi By NA

Rischio s. Beckwith-Wiedemann da disomia uniparentale 11 Mosaicismo trisomia 11 Solo 2 casi in letteratura, con bassa frequenza (2.7 e 5.5%), apparentemente non associati ad alterazioni fenotipiche Rischio s. Beckwith-Wiedemann da disomia uniparentale 11 By NA

Complementazione gametica Recupero dello zigote trisomico Meccanismi UDP Complementazione gametica Recupero dello zigote trisomico Duplicazione mitotica Errore post-zigotico By NA

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DISOMIA UNIPARENTALE CROMOSOMA 11 Regione 11p15.5 eterodisomia paterna  Alterata espressione di geni da imprinting genomico 2 casi di s. Beckwith-Wiedemann By NA

DISOMIA UNIPARENTALE CROMOSOMA 11 P F M P F M P F M Polimorfismi Cromosoma 11 - Tecnica PAGE By NA

Attesa Fenotipo nella norma Mosaicismo trisomia 11 Esame citogenetico: Cariotipo 46,XY (150 metafasi) Attesa Fenotipo nella norma (follow-up a 24 mesi) Screening molecolare con microsatelliti cromosoma 11: Esclusione UDP By NA

Mosaicismo III livello Mosaicismo trisomia 4 Paziente di 40 anni Indicazione: età  Cariotipo fetale 46,XX (31 cloni)/47,XX,+4 (9 cloni) Mosaicismo III livello By NA

Solo 3 casi in letteratura: Mosaicismo trisomia 4 Solo 3 casi in letteratura: 2 con bassa frequenza ( 10%), apparentemente non associati ad alterazioni fenotipiche 1 con an. faciali e malf. multiple: ad 1 anno buon follow-up Problema UPD By NA

Mosaicismo trisomia 4 Counselling Ecografia/Ecocardiografia fetale Prelievo sangue funicolare per esame cariotipo ed esclusione UPD In caso di interruzione: Esame citogenetico su tessuti diversi By NA

Mosaicismo trisomia 4 Fetal MRI Ipoplasia cerebellare Ventricolomegalia borderline Fetal MRI By NA

Mosaicismo trisomia 4 CAV completo By NA

Mosaicismo trisomia 4 Micrognazia Ipotelorismo Deformità rachide (emivertebre) s. atresia esofagea By NA

Mosaicismo trisomia 4 DISOMIA UNIPARENTALE P CF M P CF M D4S243 D4S175 Polimorfismi Cromosoma 4 - Tecnica PAGE By NA

Diagnosi Malattie DNA Numero elevato malattie Numero elevato di mutazioni (es. Fibrosi cistica) Coinvolgimento geni diversi (es. Retinite pigmentosa) By NA

Diagnosi Malattie DNA - Prerequisiti Conoscenza gene/i Identificazione della specifica mutazione By NA

Conoscenza geni Complesse Mendeliane (loci suscettibilità) Talassemia ApoE  Alzheimer 19p13;Xq24  Cefalea 12q;2q  Diabete NID 3q21  Psoriasi Mendeliane Talassemia Fibrosi cistica Chorea di Huntington Distrofia di Duchenne By NA

geni noti 30% (60-70% pazienti) Conoscenza geni 8000 malattie  geni noti 30% (60-70% pazienti) By NA

Diagnosi Malattie DNA - Prerequisiti Conoscenza gene/i implicati  Identificazione della specifica mutazione By NA

Distrofia Muscolare di Duchenne (DMD) Una delle più comuni malattie genetiche dell’infanzia Ubiquitariamente diffusa nel mondo Colpiti pressochè esclusivamente maschi Ereditata come malattia recessiva X-linked Si manifesta con debolezza muscolare progressiva. I muscoli mostrano una pseudo-ipertrofia, molto evidente nel polpacci: in realtà le fibre muscolari sono rimpiazzate da tessuto grasso/adiposo. By NA

 livelli CK Biopsia muscolare DIAGNOSI DMD Progressiva perdita muscolare e debolezza. Ridotta contrazione muscolare. Incurvamento della colonna vertebrale. Posizionamento doloroso delle articolazioni. Difficoltà nei movimenti quotidiani.  livelli CK Biopsia muscolare By NA

DIAGNOSI DMD ANALISI DI DELEZIONE (60% circa dei casi): PCR multipla per 26 esoni dei 79 presenti nel gene. Evidenziazione degli amplificati su gel-elettroforesi Si diagnostica la delezione quando un prodotto di amplificazione è assente in due separate reazioni di amplificazione. ANALISI COMPLETA DEL GENE: Se non è presente una delezione ampia, allora si ricorre ad uno studio dettagliato del gene mediante tecniche analitiche, sino al sequenziamento diretto. Una volta trovata la mutazione nel probando, è possibile testare rapidamente qualsiasi soggetto della famiglia a rischio. By NA

MULTIPLEX P.C.R. By NA

DIAGNOSI DMD Paziente di 27 anni in gravidanza con fratello affetto da DMD  Analisi Fratello Delezione degli esoni 45-52 Studio familiare di linkage (Analisi Aplotipo con marcatori intragenici) Paziente Portatrice della Mutazione By NA

DIAGNOSI DMD Paziente 27 anni portatrice in gravidanza  Prelievo dei Villi coriali a 10 settimane 90% dei villi 10% dei villi ESTRAZIONE DNA (se possibile) Analisi molecolare Analisi cariotipo con PCR multipla By NA

Paziente di 23 anni in gravidanza con due nipoti deceduti per DMD  DIAGNOSI DMD Paziente di 23 anni in gravidanza con due nipoti deceduti per DMD  Studio familiare di linkage (Analisi Aplotipo con marcatori intragenici) By NA

DIAGNOSI DMD By NA

Paziente non Portatrice dell’Aplotipo associato alla DMD DIAGNOSI DMD Paziente non Portatrice dell’Aplotipo associato alla DMD  DIAGNOSI PRENATALE NON NECESSARIA !!! By NA

DIAGNOSI DMD Paziente di 26 anni in gravidanza (13 settimane) con due figli affetti da DMD  Analisi Figli No Delezione degli esoni Studio di linkage By NA

Aplotipo fetale ricombinante DIAGNOSI DMD Aplotipo fetale ricombinante Rischio DMD per il feto: 14% (62/79 esoni derivano dal materno normale) By NA

Fibrosi cistica 1000 variazioni di sequenza - 83% (>800) mutazioni - 17% polimorfismi Caucasici 70% F508 By NA

31 Mutazioni più frequenti D.R. = 80% By NA

Caratterizzazione clinica complessa Ragazza 17 anni Alla età di 12 anni: Iridi stellate Ritardo mentale s. Williams Personalità cocktail party By NA

DELEZIONE 7q11.23 gene ELN Dismorfismo faciale (“elfin facies”) Ritardo di crescita pre e postnatale Deficit cognitivi (alt. integrazione spazio-visiva); lieve RM Stenosi aortica sopravalvolare, s. polmonare, difetti di setto, prolasso mitrale Ipercalcemia infantile DELEZIONE 7q11.23 gene ELN SINDROME DI WILLIAMS By NA