Dottorato di Ricerca MEDICINA MATERNO INFANTILE, PEDIATRIA DELLO SVILUPPO E DELL’EDUCAZIONE, PERINATOLOGIA direttore: prof . A. Ventura Misura di allo-reattività e studio in vitro di procedure di allo-deplezione per il trapianto di cellule staminali ematopoietiche Tutore Dr. Marco Rabusin Dottoranda Elisa Piscianz XXIV Ciclo – I Anno - 2009

Obiettivi dello studio Trapianto di cellule staminali ematopoietiche (HSCT) Ricorso a donatori non compatibili (mismatched, aploidentici) Aumento della possibilità di trapianti, ma... GVHD Rischio infezioni Obiettivi dello studio Valutare la possibilità di controllare entrambi gli eventi con un’unica strategia integrata

Come… Mettendo a punto condizioni sensibili, specifiche, ripetibili e attuabili per test MLR per la selezione di linfociti alloreattivi (selective allodepletion) 1. Confronto di metodiche per misurare l’allo-reattività in vitro 2. Selezione e caratterizzazione delle cellule allo-reattive 3. Potenziamento/selezione della risposta anti-virale

1. Confronto di metodiche per misurare l’allo-reattività in vitro Fibroblasti + IFN-gamma, irradiati + CD28 Monociti + GM-CSF/IL-4 Linfociti B attivati ed espansi Fb CD40L CD19+ 7gg: 3.8% 15 gg: 22.9% 21gg: 55.3% 28gg: 74.2% CD80+, HLA DR+ analisi citometrica IFN-gamma (o CD134) CD69, CD25, HLA DR a 24 ore proliferazione a 3 giorni (CFDA-SE) Immagino che tu lo dica a voce, ma aggiungerei due parole “espansione su fibroblasti transgenici per CD40L con aggiunta di IL-4”

1. Confronto di metodiche per misurare l’allo-reattività in vitro IFN-gamma a 3 e a 10 ore Qui (e nella successiva) metterei un sottotitolo “MLR: linfociti di donatore contro B espansi”. (I punti senza B sono controlli).

1. Confronto di metodiche per misurare l’allo-reattività in vitro Antigeni di attivazione a 24 ore CD25 HLA DR CD69

1. Confronto di metodiche per misurare l’allo-reattività in vitro Proliferazione a 3 giorni

2. Selezione e caratterizzazione delle cellule allo-reattive Selezione con biglie - IFN-gamma a 18 ore - CD134 a 2 giorni - CD25 e CD71 a 4 giorni Su coppie di donatori mismatched MLR Prima e dopo deplezione

possibilità di amplificare le cellule virus-specifiche 3. Potenziamento/selezione della risposta anti-virale possibilità di selezionare le cellule responder contro l’antigene pp65 del CMV (MacKinnon) possibilità di amplificare le cellule virus-specifiche