Enzimologia clinica

Scopo valutare la concentrazione degli enzimi nei fluidi corporei a fini diagnostici Enzimi: catalizzatori biologici  aumentano la velocità di una reazione senza essere consumati

Cinetica Enzimatica E + S ES EP E + P Enzimi a substrato singolo Es. Amilasi, lipasi Enzimi a substrati multipli

Cinetica Enzimatica Free energy of activation uncatalyzed reactants DG* reactants Free Energy Free Energy DGo products products Reaction Progress Free energy change

Velocità di reazione concentrazione di substrato Influenzata da concentrazione di substrato concentrazione di enzima temperatura pH cofattori coenzimi attivatori inibitori

Legge di Michaelis-Menten Basse concentrazioni  Reazione di primo ordine Alte concentrazioni  Reazione di ordine 0 Costante di Michaelis-Menten è la concentrazione di substrato che corrisponde ad una velocità di reazione pari al 50% del massimo

Enzimi: specificità di substrato

Localizzazione Enzimatica Liberi nelle cellule di diversi tessuti ed organi Confinati in particolari strutture all’interno delle cellule stesse In un determinato tessuto od organo specifico  enzimi organo specifici

Gli enzimi nel sangue spesso non hanno un ruolo fisiologico presenti anche in situazioni normali invecchiamento fisiologico turnover cellulare eliminati da sistema reticolo endoteliale Rene (es. amilasi) livello di attività normale nel siero è funzione di velocità di rilascio clearance emivita 2 ore (CK-BB) 170 ore (ALP placentare)

Aumento degli enzimi nel plasma: necrosi o danno cellulare  citolisi  fuoriuscita enzimi Fattori tossici Ischemia aumentato turnover cellulare Accrescimento Rigenerazione cellulare Neoplasie Gravidanza Induzione enzimatica Farmaci (es. Fenobarbital, alcool) Patologie (es. colestasi) Ostruzione dei dotti escretori  enzimi presenti nelle secrezioni esocrine si trovano nel plasma

Liberazione enzimi nel circolo la velocità di comparsa nel sangue dipende da passaggio nel sangue diretto attraverso il circolo linfatico localizzazione intracellulare citoplasmatica mitocondriale

Fluidi utilizzati siero sangue plasma orine liquor cefalorachidiano versamenti fluidi extracellulari

usi patologie epatiche patologie cardiache patologie muscolari patologie pancreatiche patologie ossee patologie autoimmuni patologie gastroenteriche neoplasie

Metodiche di analisi controllo di ed ottimizzazione di pH temperatura concentrazione di substrato che permetta di ottenere una cinetica di grado 0 metodiche immunologiche

Metodiche di analisi Metodiche enzimatiche metodiche immunologiche controllo di ed ottimizzazione di pH temperatura concentrazione di substrato che permetta di ottenere una cinetica di grado 0 metodiche immunologiche