ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO

Presentazione sul tema: "ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO"— Transcript della presentazione:

1 ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO
Esercitatori

2 CONDIZIONI DI UTILIZZO PER LA PCR
30’’ 1’ 30’’’ 5’ 4°C  28 Cycles CONDIZIONI DI UTILIZZO PER LA PCR Thermal Cycler (2n-2n)x n= cycles number x= starting template DNA The integrity of PCR amplicons will be analyzed by electroforesis 2° DAY

3 ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO
Permette la separazione di acidi nucleici in funzione delle loro dimensioni, della carica e della forma E’ una tecnica fondamentale per: 1_l’analisi (elettroforesi analitica); 2_la purificazione degli acidi nucleici (elettroforesi preparativa) 2° DAY

4 ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO
catodo anodo ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO - + RNA e DNA sono carichi negativamente 2° DAY Gli acidi nucleici sono carichi negativamente ed in un campo elettrico migrano dal polo negativo verso il polo positivo.

5 ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO
Effetto “setaccio” in un gel uniforme ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO Nell’elettroforesi gli acidi nucleici vengono sottoposti ad un campo elettrico (vengono “fatti migrare” o “correre”) all’interno di una matrice (gel di agarosio o poliacrilammide). - 2° DAY +

6 ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO
L’agarosio è un polisaccaride, isolato da un’alga, costituito da residui alternati di D-galattosio e 3,6-anidro-L-galattosio. ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO L’elettroforesi in gel di agarosio consente la separazione di molecole di grandi dimensioni ( paia basi). 2° DAY Risoluzione Concentrazione di agarosio 0.8% : – 20 kb 2% : – 3 kb

7 PROTOCOLLO GEL AGAROSIO
1% agarose gel in 1X TAE electroforesis buffer Run Time: 40 min. Voltage: 80 V Samples: 1/20 final Volume (5 l) + Loading buffer PROTOCOLLO GEL AGAROSIO 100V 0,2A Polo + Polo - 2° DAY

8 ON CORSA SU GEL AGAROSIO 100V 0,2A Polo - Polo + White 2° DAY UV

9 CORSA SU GEL DI AGAROSIO DEI PLASMIDI
3° DAY

10 NANODROP: Dosaggio Spetrofotometrico del DNA Plasmidico
3° DAY