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Costanti di ionizzazione. MODALITA DI PREPARAZIONE DI SOLUZIONI TAMPONE.

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Presentazione sul tema: "Costanti di ionizzazione. MODALITA DI PREPARAZIONE DI SOLUZIONI TAMPONE."— Transcript della presentazione:

1 Costanti di ionizzazione

2 MODALITA DI PREPARAZIONE DI SOLUZIONI TAMPONE

3 Esempio: calcolare il pH di una soluzione tampone che contiene CH 3 COOH 0,10 M e CH 3 COONa (acetato di sodio) 0,20 M. K a dellacido acetico = 1.7 x In soluzione acquosa il sale acetato di sodio si dissocia come segue: CH 3 COONa(s) CH 3 COO - (aq) + Na + (aq) per cui la concentrazione CH 3 COO - (la base) in soluzione risulta pari a 0.20 M Applicando lequazione di Henderson-Hasselbalch si ottiene: Il pK a dellacido acetico è: log 2pH= log4.77 COOH][CH ]COO[CH logpKpH 3 3 a

4 Esempio: calcolare il pH di una soluzione tampone che contiene NH M e NH 4 Cl 0.20 M. K b di NH 3 = 1.8 x K b di NH 3 = 1.8 x Sapendo che K w = K a x K b K a = K w /K b K a = 1.0 x /1.8 x = 5.6 x il pKa è 9,25 Si applica poi lequazione di Henderson-Hasselbalch: In soluzione acquosa il sale cloruro di ammonio si dissocia come segue: NH 4 Cl(s) NH 4 + (aq) + Cl - (aq) NH 4 Cl(s) NH 4 + (aq) + Cl - (aq) per cui la concentrazione di NH 4 + (lacido) in soluzione risulta pari a 0.20M log 0.5pH= log ][NH ] logpKpH 4 3 a 9.25

5 Esempio: calcolare il rapporto fra la concentrazione di acido acetico e di ione acetato necessari per preparare una soluzione tampone a pH 4,9. pK a dellacido acetico = 4,77 Ciò vuol dire che per ogni mole di acido acetico è necessario aggiungere 1,35 moli di acetato di sodio Applicando lequazione di Henderson-Hasselbalch si ha:

6 Esempio: calcolare il pH e la M della soluzione tampone preparata miscelando 20ml di NaOH 0,2M e 50ml di CH 3 COOH 0,1M moli NaOH = 0,02L x 0,2mol/L = 4·10 -3 moli moli CH 3 COOH= 0,05L x 0,1mol/L = 5 ·10 -3 moli CH 3 COOH +NaOH CH 3 COO - + Na + + H 2 O (5mmol) (4mmol) (4mmol) (4mmol) (4mmol) (5-4=1mmol) Volume finale = 70ml [CH3COOH] = 1/70 = 0,014 M [CH3COO - ] = 4/70 = 0,057 M

7 Applicando lequazione di Henderson-Hasselbalch si ottiene: COOH][CH ]COO[CH log4,77pH = log4,77 pH 0,057 0,014 pH= 4, = 5,37 La M del tampone preparato è: M = 5 mmoli (4 mmol CH 3 COO - +1 mmol CH 3 COOH)/70 ml = 0,0714M

8 Procedure di preparazione di una soluzione tampone Una soluzione tampone è sempre costituita da un acido debole HA e dalla sua base coniugata A - oppure da una base debole B e dal suo acido coniugato B +. Le soluzioni tampone possono essere preparate in vari modi:

9 I campioni da separare in SDS-PAGE vengono prima fatti bollire per 5 minuti in un tampone (sample buffer) contenente SDS e β-mercaptoetanolo E stato dimostrato empiricamente che affinchè tutte le proteine siano rivestite uniformemente con SDS è sufficiente una concentrazione di SDS dello 0,1% (peso/vol) LSDS è aggiunto nel sample buffer, nello stacking gel e nel resolving gel Il sample buffer contiene anche un colorante tracciante ionizzabile (blu di bromofenolo), il quale consente di seguire landamento della corsa elettroforetica Sono presenti inoltre saccarosio e glicerolo, i quali hanno la funzione di rendere più densa la soluzione del campione, consentendo di stratificare senza problemi il campione sul fondo del pozzetto di caricamento del gel dove è presente il tampone di corsa Il blu di bromofenolo, essendo una molecola molto piccola, non subisce alcun effetto frizionale per cui rappresenta il fronte del gel Lelettroforesi termina, e dunque viene tolta la corrente, quando il blu di bromofenolo raggiunge il fondo del gel

10 Il gel di separazione, generalmente lungo 10 cm, è polimerizzato allinterno di dueIl gel di separazione, generalmente lungo 10 cm, è polimerizzato allinterno di due lastrine di vetro, separate tra loro da due spaziatori di Teflon spessi 1,5 mm Lo stacking gel è versato sopra il gel di risoluzione e vi si inserisce un pettine perLo stacking gel è versato sopra il gel di risoluzione e vi si inserisce un pettine per formare i pozzetti per il caricamento dei campioni Lo stacking gel è generalmente lungo 1 cmLo stacking gel è generalmente lungo 1 cm


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