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I microrganismi nella digestione anaerobica: casi di studio Dr.ssa Aurora Rizzi Dipartimento di Scienze e Tecnologie Alimentari e Microbiologiche (DISTAM),

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Presentazione sul tema: "I microrganismi nella digestione anaerobica: casi di studio Dr.ssa Aurora Rizzi Dipartimento di Scienze e Tecnologie Alimentari e Microbiologiche (DISTAM),"— Transcript della presentazione:

1 I microrganismi nella digestione anaerobica: casi di studio Dr.ssa Aurora Rizzi Dipartimento di Scienze e Tecnologie Alimentari e Microbiologiche (DISTAM), Università di Milano workshop ERSAF, 28 maggio, 2008

2 Olive Mill Wastewater Southern Europe Countries world major producers of olive oil and hence major producers of OMW OMW characteristsics Very high COD (up to 200 g l -1 ) High content of polyphenols (up to 6 g l -1 ) Relatively low pH (4-5) OMW anaerobic digestion CH 4 production Spontaneous separation of CH 4 Low sludge production [Bertin et al FEMS Microbiol. Ecol. 48: ] Polyphenols can strongly decrease the process efficiency being toxic for methanogenic Archaea, a key component of the reactor microflora [Field & Lettinga 1987 Water Res. 21: ] How methanogen community respond to increasing OMW organic loads?

3 OMW Effluent Biogas Gas Counter GC OMW Influent Fixed bed filter Contact reactor Anaerobic Digester for OMW Treatment Anaerobic digester (11 L) Up-flow fixed bed digester (7.5 L) Contact reactor (3.5 L) Packing with wood chips HRT = 48 h Temperature = 37 °C Vol. Org. Load = 1-15 g COD l -1 d -1 OMW-Influent Diluted OMW Influent pH = N correction with NH 4 Cl Influent COD = g l -1

4 Process Performances COD removal VOL (g COD l -1 d -1 ) CH 4 (l/10g COD rem) VOL CH 4 COD Removal (%) Time (d)

5 Process Performances -VFA: below 800 mg l -1 -Acetic acid (C2): % of VFA Low VFA and C2 indicate efficient acetogenic and methanogenic phases VFA C2 VOL Time (d) VOL (g COD l -1 d -1 ) VFA and C2 (mg l -1 ) - At VOL 10 g COD l -1 d -1 the effluent COD is 1.6 g l -1 - Since 1g C2 gives 1g COD, more than 50% of effluent COD was due to VFA - Hence low residual polyphenols A decrease of specific CH 4 production at VOL of 10 g COD l -1 d -1 !!

6 The average recovery of polyphenols on the basis of addition of known concentrations of gallic acid was 59%. The average percent removal of polyphenols in the ractor was 89.5% [100% for 2-(p-hydroxy)phenilethanol]. Removal of 2-(p-hydroxy)phenilethanol was calculated on the basis of the response factor of the corresponding standard while the content of the remain polyphenols was calculated using the responce factor of caffeic acid.

7 Methanogenic Archaeal Community No apparent changes in the methanogen assemblage in the effluent as shown by MPN counts and coenzyme F 420 VOL (g COD l -1 d -1 ) F 420 Coenzyme (nmoles g -1 VSS) Time (d) F 420 VOL VOL ( g COD l -1 d -1 ) Methanogen counts (Log MPN g -1 VSS) H 2 Acetate

8 Analysis of Methanogenic Archaeal Community Preparazione delle singole eliche A- con la temperatura B- con primer fosforilati e digestione con-esonucleasi exon. C- con primer biotinilati e cattura magnetica biotin Streptavidin+magnetic beads magnet Double str. AB C single strands Analysis by SSCP (Single Strand Conformation Polymorphism) can resolve the diversity of bacteria and Archaea by separation of single strand fragments with different conformations

9 Methanogenic Archaeal Community: Diversity - PCR with a P-labelled primer - -nuclease digestion of the P-labelled strand - PCR on a collection of 30 methanogen species - PCR on biofilm collected at 5.7 and 10 g COD l -1 d -1 No apparent qualitative differences in the Archaea community pattern. The methanogen community was apparently dominated by M.bacteriumM.sarcina/M.saeta H 2 consuming Acetate consuming 5 end phosphorilated primer SSCP analysis of 16S rRNA gene P Methanogen-specific primer Archaea-universal primer

10 Methanogenic Archaeal Community: Abundance Quantification of the different phylogenetic groups of methanogens based on extinction of PCR signals amplified from biofilm sludge DNA [Wang et al., 1996 Appl. Environ. Microbiol. 62: ] PCR sensitivity (the minimal n° of cells giving amplification) PCR titer (The maximum sludge DNA dilutions for positive PCR) PCR sensitivity DNA extr. Microscopic cell counts Culture Culture dilutions PCR Sample Sample dilutions DNA extr PCR PCR Titer

11 Methanogenic Archaeal Community: Abundance Specific PCR for the different phylogenetic groups of methanogens were set up basing on 16S rRNA gene signatures [Raskin et al., 1994 Appl. Environ. Microbiol. 60: ] 5 end bitinilated probe Magnetic Capture hybridization B Methanogen-specific primer Archaea-universal primer Fwd M.bact.M.sarc.M.coc.M.micr Specific PCR

12 Methanogenic Archaeal Community: Abundance Following VOL increase methanogen community responded by changing the relative abundance of different phylogenetic/physiological groups VOL = 5.7 (5.7 g COD l -1 d -1 ) VOL = 10.1 (g COD l -1 d -1 ) PCR TITER IN THE BIOFILM H 2 consuming Acetate consuming M.bacteriaceae M.microbiaceae M.coccaceaen.d.n.d. M.sarcina/M.saeta H2H2 H2H Methanogen counts (Log MPN g -1 VSS) Acetate

13 Conclusions In the adopted reactor OMW were efficiently treated (COD removal around 90%) up to VOL of 15 g COD l -1 d -1 A decrease of CH 4 specific production occurred at VOL of 10 g COD l -1 d -1 The overall diversity of methanogen was not affected as shown by SSCP and sequencing Methanogen community reacted by re-balancing the H 2 trophic/acetotrophic methanogen ratio

14 TRATTAMENTO DEGLI EFFLUENTI DI CANTINA VINICOLA Gli scarti delle cantine vinicole sono costituiti dalle acque di lavaggio degli impianti di vinificazione e contengono parti dei raspi e le bucce degli acini I reflui di cantina contengono concentrazioni residue di zuccheri e acido tartarico (dalluva), etanolo, acido acetico e acido lattico (residui delle fermentazioni) I reflui che derivano dalla vinificazione del vino rosso contengono anche considerevoli quantità di composti fenolici (antociani e tannini) che possono avere effetto tossico sui microrganismi coinvolti nella degradazione anaerobica, in particolare i metanogeni. Trattamento dei reflui di cantina: trattamento aerobico elevato consumo di energia richiesto dallaerazione, e necessità di aggiungere nutrienti digestione anaerobica abbattimento del carico organico, con recupero di energia (produzione di metano)

15 TRATTAMENTO DEGLI EFFLUENTI DI CANTINA VINICOLA Un processo di digestione anaerobica degli effluenti di cantina vinicola è stato messo a punto in un impianto in scala di laboratorio IMPIANTO: digestore cilindrico, h= 130 cm, riempito con materiale inerte di riempimento (truciolato di legno) come matrice di supporto. Caricamento in fase ascendente. Il digestore conteneva una microflora selezionata nei trattamenti dei precedenti anni (depurazione degli effluenti di pirolisi, dellacqua di vegetazione delle olive, degli impasti di cartiera) TRATTAMENTO: le acque di cantina erano diluite fino ad avere un carico organico di COD=7-7,5 g/l, ed addizionate di NaHCO 3 e NH 4 Cl. Dopo un periodo di adattamento, il reattore ha raggiunto una fase di equilibrio steady state con una rimozione del COD del 90%. Il carico organico è stato quindi aumentato a 10,5-12,5 gCOD/ld, diminuendo il tempo di ritenzione a 16-17h

16 TRATTAMENTO DEGLI EFFLUENTI DI CANTINA VINICOLA La digestione anaerobica delle acque provenienti dalla vinificazione in rosso è risultata meno efficiente rispetto a quella in bianco: minore rimozione di COD inferiore produzione di metano maggior contenuto di AGV nelleffluente (segnale di uninibizione dei processi di acetogenesi e metanogenesi) le cariche dei metanogeni presenti nella fase circolante sono inferiori, mentre i batteri eterotrofi e glucosio-fermentanti sono superiori

17 TRATTAMENTO DEGLI EFFLUENTI DI CANTINA VINICOLA Il reattore è in grado di recuperare rapidamente (circa 10 giorni) shocks da carico organico pari ad un aumento improvviso di tre volte del carico organico specifico volumetrico

18 METANOGENESI A BASSA TEMPERATURA Start-up and operation of an anaerobic high-rate staged expanded granular sludge bed (EGSB) system for the treatment of cold (3 to 8°C), dilute wastewater (0.5 to 0.9 g of COD liter -1 ), containing 12 mg of O 2 liter -1

19 METANOGENESI A BASSA TEMPERATURA

20 POTENZIALITA DELLA PRODUZIONE DI METANO - Trattamento termofilo reflui acidificati - Reattori UASB multipli - Carico organico fino a 100 kg COD m -3 day -1

21 POTENZIALITA DELLA PRODUZIONE DI METANO - Rimozione del COD > 90% - Tempo di ritenzione idraulico = h - Produzione di biogas m 3 m -3 reattore day -1

22 Grazie per lattenzione !


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