Tesi in Microbiologia Dipartimento di Farmacia e Biotecnologie (FaBiT) Prof. Giorgio Gallinella (giorgio.gallinella@unibo.it) Prof.ssa Giovanna Gentilomi Dott.ssa Elisabetta Manaresi (ricercatore) Dott.ssa Francesca Bonvicini (ricercatore) Dott.ssa Gloria Bua (assegnista) Dott.ssa Ilaria Conti (dottoranda) Microbiologia (padiglione 11, 3° piano) Policlinico universitario S. Orsola Microbiologia

Parvovirus B19 Tassonomia: Famiglia = Parvoviridae Sottofamiglia = Parvovirinae Genere = Erythrovirus Specie = B19 (Genotipi 1-3) Capside icosaedrico di 22 nm di diametro - ssDNA di 5596 nucleotidi a polarità +/- NS VP1u VP2 Microbiologia

Parvovirus B19 Trasmissione per via respiratoria Target principale: Cellule progenitrici eritroidi del midollo osseo Patogenesi: Eritema infettivo o V malattia Sindromi poliatropatiche Crisi aplastiche transitorie Ipoplasia eritrocitaria Idrope e/o morte fetale Vaccini Terapia antivirale Trasfusioni sangue IVIG Microbiologia

Tecniche utilizzate Tecniche di coltura in vitro di cellule eucariotiche (coltura primaria di cellule progenitrici eritroidi EPCs, linea cellulare UT7/EpoS1) Tecniche di biologia molecolare: clonaggio in vettori plasmidici, trasformazione di batteri competenti e purificazione di DNA plasmidico; trasfezione di cellule eucariotiche; saggi di vitalità cellulare; saggi di immunofluorescenza su vetrino (IIF); saggi di ibridazione molecolare in situ (FISH); analisi al citofluorimetro per la ricerca di antigeni virali e cellulari; purificazione di acidi nucleici con estrattori automatici; Southern-Blot; PCR (PCR end point, PCR real time, RT-PCR real time). Microbiologia

linee di ricerca Ricerca di potenziali molecole con attività antivirale (antivirali ad ampio spettro, retargeted drug, molecole di nuova sintesi) Studio dell’interazione virus-cellula Sviluppo ed ottimizzazione di un sistema sintetico per la produzione di Parvovirus B19 Microbiologia

1. Ricerca di potenziali molecole con attività antivirale Linee di ricerca: 1. Ricerca di potenziali molecole con attività antivirale Saggi di vitalità cellulare EPCs o linea di UT7/EpoS1 infettate con B19V + composto con ipotetica attività antivirale Real Time PCR per la quantificazione del DNA virale IIF per le proteine capsidiche Effetti dell’idrossiurea su B19V ed EPCs Microbiologia

2. Studio dell’interazione virus-cellula Linee di ricerca: 2. Studio dell’interazione virus-cellula Valutazione della replicazione del B19V ed espressione degli antigeni virali: Real Time PCR, FISH per la ricerca degli acidi nucleici virali Immunofluorescenza indiretta, citofluorimetria per l’analisi dell’espressione di proteine virali Citofluorimetria per l’analisi delle proteine e del DNA cellulari EPCs o linea di UT7/EpoS1 infettate con B19V Microbiologia

Linee di ricerca: 3. Sviluppo ed ottimizzazione di un sistema sintetico per la produzione di B19V Genoma di B19V clonato in un vettore plasmidico Valutazione della replicazione del B19V ed espressione degli antigeni virali: Real Time PCR, FISH per la ricerca degli acidi nucleici virali Immunofluorescenza indiretta per l’analisi dell’espressione di proteine virali Nucleofezione di UT7/EpoS1 Infezione di EPCs FISH per il DNA virale Microbiologia

Informazioni generali Posti disponibili per CTF 1 studente all’anno Durata della tesi Minimo 6 mesi (massimo 9 mesi) Periodo di svolgimento del tirocinio Avere terminato il tirocinio in farmacia Essere a buon punto con gli esami Consiglio sui corsi a scelta da frequentare Nessuna richiesta particolare Microbiologia