Progetto CLIL - Esperimento Finale by Andrea e Chiara

Ipotesi Sperimentale Geni espressi (MARKER): OCT4 è una proteina coinvolta nell'auto-rinnovamento di cellule embrionali. Nestin (neuroectodermal stem cell marker) è una proteina implicata nella crescita degli assoni, espressa solo nelle staminali del cervello. 18S rRNA è un componente dei piccoli ribosomi eucarioti. É espresso in tutte le cellule del nostro corpo. Il segnale di induzione neurale utilizzato porta agli stessi effetti di quello che avviene durante lo sviluppo del bambino? Ipotesi Sperimentale (ovvero perché facciamo l’esperimento): Il segnale di Induzione neurale utilizzato porta agli stessi effetti di quello che avviene durante lo sviluppo del bambino? Esattamente, il processo è lo stesso che avviene durante lo sviluppo del cervello solo che viene effettuato in laboratorio

Protocollo sperimentale I - 6 gruppi GENE CEL LULA Nestin Oct4 18S 1 3 5 2 4 6 Diagramma (v. foto sul telefono) con aggiunte (v. foto sul telefono)

Perché tutta questa attenzione... ...al Rischio Contaminazione? Perché il risultato deve essere indipendente da fattori esterni all’esperimento ...alle quantità esatte? Perché i risultati ottenuti devono essere riproducibili nelle stesse condizioni Ricerca riproducibile quantità esatte, come per fare la pasta (esempio delle ricette di cucina) Rischio contaminazione gruppi di controllo, TROVARE ESEMPIO

La Reazione di Polimerizzazione a Catena (PCR) ...Obiettivo: amplificare frammenti di DNA 30 Cicli, ognuno raddoppia il numero (più di un miliardo per ogni filamento di partenza) Nucleotidi cDNA 72° - 5 min 95° - 2 min 95° - 15 s Primer 58° - 15 s PCR (incubatrice, che funziona come un forno col timer) Manca la primasi, che non so cosa mettere 72° - 15 s Polimerasi

Protocollo sperimentale II - ElettroForesi su Gel ...Obiettivo: separare i frammenti Preparazione del Gel → agarosio + colorante UV Caricamento dei pozzetti 6 test 6 controlli Quando c’è elettricità, il DNA “corre” verso l’anodo (+) raccogliendo il colorante { Samples (DNA) { Control (H2O) ClearsightⓇ Agarose

Risultati Work in progress...

GRAZIE per l’attenzione… Domande?

Classe 5bsa Liceo Scientifico “Galileo Galilei” - Trento foto di classe