Come si studia il DNA
Estrazione DNA Cellule/tessuti Incubare a 56°C in presenza di proteasi, RNA-asi e detergente Trattare con fenolo/cloroformio Infine, la fase acquosa contenente il DNA viene trattata con etanolo per precipitare il DNA
Taglio del DNA: gli enzimi di restrizione, potenti forbici molecolari
Gli enzimi di restrizione Gli enzimi di restrizione (detti anche endonucleasi di restrizione) si legano al DNA in corrispondenza di specifiche sequenze e tagliano un filamento di DNA in un punto e l’altro filamento in un punto differente, così che si formano 2 estremità “appiccicose” che permetteranno il successivo riappaiamento EcoRI, uno dei tanti enzimi di restrizione ottenuto da Escherichia coli
PCR: Polymerase Chain Reaction Kary Mullis Premio Nobel per la Chimica nel 1993 Polymerase Chain Reaction The PCR method – a copying machine for DNA molecules
1) Stampo di DNA 2) Denaturazione a 95°C
3) Aggiunta dei primer 17-24 bp, temperatura 50-60°C 4) Sintesi di DNA nuovo: 72°C, TaqPOL e NTP
Si ripetono i cicli 30-35 volte
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