UNIVERSITA’ DEGLI STUDI DI PALERMO FACOLTA’ DI FARMACIA DOTTORATO DI RICERCA IN SCIENZE FARMACEUTICHE XXIII CICLO Il fitochimico indicaxantina previene stress ossidativo, arresto del ciclo cellulare ed apoptosi indotta da 7-ketocolesterolo in monociti-macrofagi umani in coltura Coordinatore del dottorato: Prof. Girolamo Cirrincione Tutor: Dr. Carla Gentile Dottorando: Alessandro Attanzio
SCOPO DELLA RICERCA Valutazione della capacità dell’indicaxantina a prevenire gli effetti pro-ossidanti e pro-apoptotici indotti da 7-KC in cellule THP1-macrofagi umani in coltura
Attività Riducente/Antiossidante Antiinfiammatoria
Approccio sperimentale Vitalità cellulare Apoptosi: Studio della morfologia cellulare mediante microscopia a fluorescenza Analisi citofluorimetrica dell’esternalizzazione di PS Analisi citofluorimetrica del ΔΨm mitocondriale Analisi citofluorimetrica del ciclo cellulare Stress ossidativo endocellulare: Analisi citofluorimetrica dei ROS/RNS intracellulari Analisi spettrofotometrica dei tioli cellulari Analisi citofluorimetrica del Ca+2 intracellulare
Studio della vitalità cellulare I valori che non presentano la stessa lettera sono significativamente differenti (P <0.05, Fisher’s test). I risultati sono la media ± SD di tre esperimenti indipendenti condotti in triplicato.
Valutazione della morfologia cellulare mediante AO/EB staining
AnnexinV-FITC staining
Analisi citofluorimetrica del ciclo cellulare
DiOC6 staining: valutazione del m mitocondriale
ROS
Analisi citofluorimetrica dei livelli intracellulari di ROS/RNS Analisi spettrofotometrica dei tioli intracellulari
Fluo-3 AM staining: misura dei livelli di Ca+2 intracellulare
CONCLUSIONI
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