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RNA interference Premio NOBEL 2006 Fire e Mello. Gene expression Central dogma of molecular biology.

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Presentazione sul tema: "RNA interference Premio NOBEL 2006 Fire e Mello. Gene expression Central dogma of molecular biology."— Transcript della presentazione:

1 RNA interference Premio NOBEL 2006 Fire e Mello

2 Gene expression Central dogma of molecular biology

3 Le funzioni dellRNA RNA a singolo filamento è un intermedio cruciale dellespressione genica; RNA transfer e ribosomale hanno funzioni strutturali, catalitiche e di decodifica dellinformazione nella biosintesi proteica;

4 Nel 1998 Fire e Mello annunciano la scoperta dellRNA interference nel verme.

5 RNA interference

6 Cosa è? Ė una forma di silenziamento genico (post- trascriptional gene silencing, PTGS) mediata da un doppio filamento di RNA (dsRNA). Ė un processo in cui un doppio filamento di RNA segnala la degradazione di un RNA messaggero omologo. In pratica…

7 Diversi tipi di RNA interference Micro interference RNA (miRNA o MIR) Sequenze presenti nel nostro genoma, nella regione non coding del DNA Small interference RNA (siRNA) RNA a doppio filamento Inseriti artificialmente

8 lunghi mRNA trascritti nel nucleo Struttura ad ansa e stelo Contengono due sequenze complementari con una non complementare al centro (ansa) Si ripiegano a formare un hairpin PRE-PRO-MIR Come si formano i MIR

9 Il precursore miRNA è processato dallenzima Drosha in pre-miRNA di 70 nucleotidi; Il pre-miRNA è traslocato nel citoplasma da una proteina chiamata esportina-5; Viene ulteriormente processato dallenzima DICER in MIR maturo di nucleotidi Fasi di maturazione dei MIR

10 Come viene silenziato un gene? Uno dei due filamenti del MIR (quello complementare allRNAm) è incorporato in un complesso proteico chiamato RISC (RNA-induced silencing complex). Il RISC ha il compito di proteggere e guidare il MIR sul suo bersaglio/i

11 Come i MIR modulano la trascrizione genica? Il mir riconosce per complementarietà NON PERFETTA la sequenza al 3 dellRNAm Questo causa un ingombro sterico che impedisce al ribosoma di cominciare la traduzione

12 A differenza dei MIR, i siRNA (RNA silenziatori artificiali) riconoscono una sequenza PERFETTAMENTE COMPLEMENTARE dellmRNA Ne inducono la degradazione attivando un enzima presente nel RISC Come i siRNA modulano la trascrizione genica?

13 Utilizzo dei MIR nella ricerca

14 Un esempio in Drosophila Espressione di un shRNA per il gene white Mancanza di pigmentazione


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