DNA fingerprinting LLC Trieste
DNA fingerprinting E’ un metodo di identificazione che consiste nel comparare DNA provenienti da individui diversi al fine di metterne in risalto le similitudini LLC Trieste
“impronta digitale del DNA” DNA fingerprinting Letteralmente: “impronta digitale del DNA” ...sottolinea la caratteristica di unicità del DNA : DNA diverso per individui diversi DNA uguale fra 2 individui SOLO se questi sono gemelli monozigoti identici LLC Trieste
IL DNA LLC Trieste
Utilizzi storici della tecnica (analisi del polimorfismo RFLP) STUDI EVOLUZIONISTICI STUDI MEDICI MEDICINA FORENSE LLC Trieste
Scopo dell’esperienza Riprodurre un’indagine della polizia scientifica, nel corso della quale il materiale rinvenuto sulla scena del delitto viene confrontato con quello di alcuni sospettati, tra cui va individuato il colpevole. A scopo didattico utilizzeremo come fonte di materiale da analizzare il DNA plasmidico. LLC Trieste
Il plasmide DNA circolare a doppio filamento autoreplicante si trova in tutti i procarioti reca vantaggio ambientale ereditato in forma extracromosiomiale LLC Trieste
LA TECNICA Digestione: frammentazione del campione di DNA ad opera degli enzimi di restrizione. Elettroforesi: separazione dei frammenti di DNA in funzione delle loro dimensioni. Colorazione: dei frammenti di DNA e loro osservazione LLC Trieste
Enzimi di restrizione E.R. In natura fanno parte dell’arsenale difensivo procariotico contro i fagi, sono: sito specifici dna specifici LLC Trieste
Digestione L’E.R. taglia entrambi i filamenti di DNA interrompendo i legami tra lo zucchero e il fosfato. LLC Trieste
LA TECNICA Digestione: frammentazione del campione di DNA ad opera degli enzimi di restrizione Elettroforesi: separazione dei frammenti di DNA in funzione delle loro dimensioni Colorazione: dei frammenti di DNA e loro osservazione LLC Trieste
Gel all’1% di agarosio Agarosio estratto dalle alghe Agar Agar ELETTROFORESI Frammenti di DNA sottoposti a campo elettrico setaccio molecolare vengono separati in base alle loro dimensioni Gel all’1% di agarosio Agarosio estratto dalle alghe Agar Agar LLC Trieste
Immagine del gel d’agarosio Tecnica utilizzata per separare molecole di DNA in base alle loro dimensioni. LLC Trieste
Corsa elettroforetica La migrazione dei frammenti di DNA avviene in campo elettrico. LLC Trieste
Apparato elettroforetico LLC Trieste
LA TECNICA Colorazione: dei frammenti di DNA e loro osservazione Digestione: frammentazione del campione di DNA ad opera degli enzimi di restrizione Elettroforesi: separazione dei frammenti di DNA in funzione delle loro dimensioni Colorazione: dei frammenti di DNA e loro osservazione LLC Trieste
Colorazione ETIDIO BROMURO BIOSAFE LLC Trieste
Osservazione: chi è il colpevole LLC Trieste