Direttore Prof. Bruno Galletti UNIVERSITA’ DEGLI STUDI DI MESSINA Dipartimento delle Specialità Chirurgiche Scuola di specializzazione in Otorinolaringoiatria Direttore Prof. Bruno Galletti Espressioni immunofenotipiche delle isoforme di p53 nella patologia oncologica testa-collo G.Cammaroto, F.Ciodaro, F.Galletti

SPLICING Origine delle ISOFORME Δ133 Introne 9 Rappresentazione schematica del gene P53 con i tre siti promoter (P). /40

Boldrup L. et al. 2007 Eur J Cancer. ISOFORME Δ133 LESIONI NEOPLASTICHE TESTA COLLO ??? PROLIFERAZIONE ? APOPTOSI ? Boldrup L. et al. 2007 Eur J Cancer. /40

Carcinoma Squamocellulare ISOFORME Δ133 COSA E’ STATO CERCATO? mRNA e Proteine Carcinoma Squamocellulare Tessuto Normale COSA E’ STATO TROVATO? p53 variant mRNAs are expressed in both normal oral stratified epithelium and SCCHN /40

Scopi della Ricerca Rilevare l’incidenza delle espressioni delle isoforme Δ 133 di P53 nelle neoformazioni del distretto testa-collo. 1 Comparare le espressioni delle isoforme Δ 133 di P53 fra le lesioni benigne e maligne del distretto testa-collo. 2 /40

9 1O 40 LESIONI TESTA - COLLO PAPILLOMI PAPILLOMI INVERTITI Materiali 40 LESIONI TESTA - COLLO 9 PAPILLOMI 1O PAPILLOMI INVERTITI ben differenziati (2) moderatamente differenziati (10) poco differenziati (9) 21 CARCINOMI /40

37 21 93 62 ± 18 3 26 38 40 Pazienti: LESIONI TESTA - COLLO ETA’ Clinica 40 Pazienti: LESIONI TESTA - COLLO ETA’ m ± DS 37 21 93 62 ± 18 3 26 38 /40

Metodi Immunoistochimica /40

Tecnica antigen retrieval Metodi - Immunoistochimica Anticorpo monoclonale DO-11 (NB100-65557) fornito dalla Novus Biological, indicato da Prof. JC Bourdon. Riconosceva la regione centrale di P53 posta fra gli aminoacidi 181 e 190. Diluizione 1: 500 Tecnica antigen retrieval /40

I II III numero dei casi positivi Criteri per l’interpretazione dell’ Immunoreattivita’ I numero dei casi positivi II numero delle cellule epiteliali positive per caso. Sono state contate 1000 cellule per caso usando un ingrandimento microscopico 40 x III localizzazione subcellulare della colorazione: citoplasmatica o nucleare /40

Grana: grossi (α) fini (β e γ). Criteri per l’interpretazione dell’ Immunoreattivita’ IV Grana: grossi (α) fini (β e γ). V metodo “Quickscore” proposto da Detre I Grado: % cellule fra 0 e 4 II Grado: % cellule fra 5 e 19 III Grado: % cellule fra 20 e 39 IV Grado: % cellule fra 40 e 59 /40

Risultati Immunoistochimica D Incidenza dell’immunoreattività per le Δ 133 di P53 dipende dal tipo di lesione del distretto testa collo? R L’espressione delle Δ 133 di P53 DIPENDE dal tipo di lesione. /40

Risultati Immunoistochimica – Incidenza di Δ133 di P53 /40

Risultati Immunoistochimica Immunoreattività delle Δ 133 di P53 in un caso di PAPILLOMA. L’immunoreazione si colloca sullo strato superficiale delle cellule epiteliali. Le cellule reattive presentano nucleo scuro, eccentrico, a livello basale ed ampio citoplasma eosinofilo superficiale. L’immunocolorazione si presenta a fini e grossi granuli. Ob. X 20, Oc. X10. /40

Risultati Immunoistochimica – Incidenza di Δ133 di P53 /40

Risultati Immunoistochimica Immunoreattività delle Δ 133 di P53 in un caso di PAPILLOMA INVERTITO. L’immunoreazione si colloca sui vari strati. L’immunocolorazione si presenta a fini e grossi granuli ed interessa sia il citoplasma che il nucleo. Ob. X 20, Oc. X10. /40

Risultati Immunoistochimica – Incidenza di Δ133 di P53 /40

Risultati Immunoistochimica Immunoreattività delle Δ 133 di P53 in un caso di CARCINOMA SQUAMOCELLULARE. L’immunoreazione si colloca sui vari strati della neoplasia. Le cellule reattive presentano nucleo scuro, eccentrico, a livello basale ed ampio citoplasma eosinofilo superficiale. L’immunocolorazione si presenta a fini e grossi granuli ed interessa sia il citoplasma che il nucleo. Ob. X 20, Oc. X10. /40

Risultati Immunoistochimica D L’immunoreattività per le Δ 133 di P53 dipende dalle benignità o malignità della Lesione? R L’espressione delle Δ 133 di P53 DIPENDE dalle malignità della lesione. /40

D 133 DI P53: DISTRIBUZIONE nelle lesioni BENIGNE E MALIGNE Risultati Immunoistochimica D 133 DI P53: DISTRIBUZIONE nelle lesioni BENIGNE E MALIGNE /40

D 133 DI P53: DISTRIBUZIONE CELLULARE nelle lesioni BENIGNE E MALIGNE Risultati Immunoistochimica D 133 DI P53: DISTRIBUZIONE CELLULARE nelle lesioni BENIGNE E MALIGNE Grado II 5-19% cellule Grado III 20-39% cellule Grado IV 40-59% cellule /40

Risultati Immunoistochimica D L’immunoreattività per le Δ 133 di P53 dipende dall’ISTOTIPO della lesione? R L’espressione delle Δ 133 di P53 DIPENDE dall ’ISTOTIPO. /40

D 133 DI P53: DISTRIBUZIONE negli istotipi BENIGNI E MALIGNI Risultati Immunoistochimica D 133 DI P53: DISTRIBUZIONE negli istotipi BENIGNI E MALIGNI /40

D 133 DI P53: DISTRIBUZIONE CELLULARE negli istotipi BENIGNI E MALIGNI Risultati Immunoistochimica D 133 DI P53: DISTRIBUZIONE CELLULARE negli istotipi BENIGNI E MALIGNI Grado II 5-19% cellule Grado III 20-39% cellule Grado IV 40-59% cellule /40

Risultati Immunoistochimica D L’immunoreattività per le Δ 133 di P53 varia con il “GRADING” ISTO-MORFOLOGICO del carcinoma squamocellulare? R L’espressione delle Δ 133 di P53 DIPENDE dal “GRADING”. /40

Risultati Immunoistochimica D 133 DI P53: DISTRIBUZIONE nei tre gradi istologici del CARCINOMA SQUAMOSO /40

Risultati Immunoistochimica Immunoreattività delle Δ 133 di P53 nel tessuto peritumorale apparentemente NORMALE in un caso di Carcinoma Squamocellulare. L’immunoreazione si colloca a livello delle strutture ghiandolari. Le cellule reattive presentano nucleo scuro, eccentrico, a livello basale ed ampio citoplasma eosinofilo superficiale. L’immunocolorazione si presenta a fini e grossi granuli ed interessa sia il citoplasma che il nucleo. Ob. X 20, Oc. X10. /40

I nostri risultati rispetto alla letteratura. Conclusioni I nostri risultati rispetto alla letteratura. Confermano che le Δ 133 di P53 sono organo specifiche. Sono LESIONE SPECIFICHE. /40

Pattern di Immunocolorazione: GRADO III e IV Conclusioni (2) Differenza fra le lesioni benigne e maligne nell’esprimere le Δ 133 di P53. Pattern di Immunocolorazione: GRADO III e IV MALIGNI PROLIFERAZIONE /40

Differenza fra gli istotipi nell’esprimere le Δ 133 di P53. Conclusioni (4) Differenza fra gli istotipi nell’esprimere le Δ 133 di P53. PAPILLOMA INVERTITO e CARCINOMA Maggior grado di espressività /40

Grading istologico dei carcinomi squamosi. Conclusioni (5) Grading istologico dei carcinomi squamosi. PROGRESSIONE di immunoreattivita’ nelle forme meno differenziate PROLIFERAZIONE /40

Relazione tra PROGNOSI e ESPRESSIONE ISOFORME P53 Prospettive STUDIO PROSPETTICO Relazione tra PROGNOSI e ESPRESSIONE ISOFORME P53 Utilità clinica /40

Grazie per l’attenzione Fine Grazie per l’attenzione /40