Parte 6 Amplificazione ed elettroforesi (Maggiore Iacovacci) Genetica Forense (6 CFU) – Fulvio Cruciani Laurea Triennale in Scienze Biologiche Sapienza Università di Roma

Amplificazione e Elettroforesi Magg inv sc Giuseppe IACOVACCI Direttore della Sezione 4^ della Banca Dati Nazionale del DNA giuseppe.iacovacci@carabinieri.it

Variazioni di lunghezza ma non solo Allele (Repeat #) Repeat Structure 27 [TCTA]4 [TCTG]6 [TCTA]3 TA [TCTA]3 TCA [TCTA]2 TCCA TA [TCTA]9 27' [TCTA]6 [TCTG]5 [TCTA]3 TA [TCTA]3 TCA [TCTA]2 TCCA TA [TCTA]8 27" [TCTA]5 [TCTG]5 [TCTA]3 TA [TCTA]3 TCA [TCTA]2 TCCA TA [TCTA]9

Multiplex PCR In forense è vantaggioso esaminare simultaneamente più loci per avere l’informazione su il massimo numero di marcatori possibile (questo ci consente, consumando la minima qunatità di DNA estratto, di applicare poi la regola del prodotto per aumentare il potere discriminante). Esempio di tipizzazione multiplex STR mediante colorazione argentica su gel denaturante di PoliAcrilammide

Utilizzo della fluorescenza abbinata alla elettroforesi capillare FAM (Blue) TAMRA (Yellow) ROX (Red) Fluorescent dye label

Lo Standard interno

Capillare riempito con POP Laser Capillare riempito con POP 5-20 kV - + Porta campioni Finestra di rilevazione (catodo) (anodo) Acquisizione ed elaborazione dati Figure 12.3 Schematic of capillary electrophoresis instruments used for DNA analysis. The capillary is a narrow glass tube approximately 50 cm long and 50 microns in diameter. It is filled with a viscous polymer solution that acts much like a gel in creating a sieving environment for DNA molecules. Samples are placed into a tray and injected onto the capillary by applying a voltage to each sample sequentially. A high voltage (e.g., 15,000 volts) is applied across the capillary after the injection in order to separate the DNA fragments in a matter of minutes. Fluorescent dye-labeled products are analyzed as they pass by the detection window and are excited by a laser beam. Computerized data acquisition enables rapid analysis and digital storage of separation results. Figure 12.3, J.M. Butler (2005) Forensic DNA Typing, 2nd Edition © 2005 Elsevier Academic Press

AmpFlSTR® Identifiler™ D8S1179 D21S11 D7S820 CSF1PO D3S1358 TH01 D13S317 D16S539 D2S1338 D19S433 D18S51 TPOX VWA AMEL D5S818 FGA GS500 LIZ size standard 6FAM (blue) VIC (green) NED (yellow) PET (red) LIZ (orange)

Direct Prevede l’amplificazione diretta senza la preventiva estrazione e quantificazione del DNA Applicabile al DNA da contatto Applicabile ai campioni biologici