Legionella pneumophila Cenni storici Agosto 1976 Philadelphia: Epidemia di polmonite nei partecipanti al Congresso della American Legion. Letalità: 15.4%.

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1 Legionella pneumophila Cenni storici Agosto 1976 Philadelphia: Epidemia di polmonite nei partecipanti al Congresso della American Legion. Letalità: 15.4%. Campioni di tessuto polmonare: microrganismi Gram- negativi di piccole dimensioni. Novembre 1978 Atlanta: Simposio Internazionale sulla “Malattia dei Legionari” Legionella pneumophila. Il ceppo isolato dai casi di Philadelphia ceppo di riferimento Philadelphia 1.

2 Legionella pneumophila Morfologia Bacillo aerobio gram-negativo. Bacillo aerobio gram-negativo. 0.3 – 0.9 µm in larghezza e 2 – 3 µm in lunghezza. 0.3 – 0.9 µm in larghezza e 2 – 3 µm in lunghezza. Mobile per la presenza di un flagello. Mobile per la presenza di un flagello.

3 Legionella pneumophila M anifestazioni cliniche Malattia dei Legionari o “Legionellosi” E’ caratterizzata da febbre, brividi, tosse secca non produttiva, cefalea, polmonite e coinvolgimento del tratto gastrointestinale, del SNC, del fegato e dei reni. E’ caratterizzata da febbre, brividi, tosse secca non produttiva, cefalea, polmonite e coinvolgimento del tratto gastrointestinale, del SNC, del fegato e dei reni. Periodo di incubazione: 2-10 giorni. Periodo di incubazione: 2-10 giorni. Mortalità: 15-20%. Mortalità: 15-20%. Febbre di Pontiac Malattia simil –influenzale caratterizzata da febbre, brividi, mialgia, malessere e mal di testa senza alcuna evidenza clinica di polmonite. Malattia simil –influenzale caratterizzata da febbre, brividi, mialgia, malessere e mal di testa senza alcuna evidenza clinica di polmonite. Periodo di incubazione: 12 ore. Periodo di incubazione: 12 ore. Mortalità: <1%. Mortalità: <1%. Malattia dei Legionari o “Legionellosi” E’ caratterizzata da febbre, brividi, tosse secca non produttiva, cefalea, polmonite e coinvolgimento del tratto gastrointestinale, del SNC, del fegato e dei reni. E’ caratterizzata da febbre, brividi, tosse secca non produttiva, cefalea, polmonite e coinvolgimento del tratto gastrointestinale, del SNC, del fegato e dei reni. Periodo di incubazione: 2-10 giorni. Periodo di incubazione: 2-10 giorni. Mortalità: 15-20%. Mortalità: 15-20%. Febbre di Pontiac Malattia simil –influenzale caratterizzata da febbre, brividi, mialgia, malessere e mal di testa senza alcuna evidenza clinica di polmonite. Malattia simil –influenzale caratterizzata da febbre, brividi, mialgia, malessere e mal di testa senza alcuna evidenza clinica di polmonite. Periodo di incubazione: 12 ore. Periodo di incubazione: 12 ore. Mortalità: <1%. Mortalità: <1%.

4 Legionella pneumophila Trasmissione Sorgente di infezione: ambiente Vie di trasmissione - Via respiratoria - Via respiratoria - Instillazione diretta nelle vie respiratorie. - Instillazione diretta nelle vie respiratorie. Modalità di trasmissione - Docce, rubinetti, idromassaggio, sistemi di condizionamento - Docce, rubinetti, idromassaggio, sistemi di condizionamento dell’aria e torri di raffreddamento. dell’aria e torri di raffreddamento. Apparecchiature per la respirazione assistita. Apparecchiature per la respirazione assistita. Fattori di amplificazione - Flora batterica ed organismi unicellulari, quali amebe, ed alghe - Flora batterica ed organismi unicellulari, quali amebe, ed alghe permettono la sopravvivenza, la moltiplicazione e la diffusione permettono la sopravvivenza, la moltiplicazione e la diffusione di L. pneumophila. di L. pneumophila. - Biofilm presente nelle tubature degli impianti idraulici dell’acqua - Biofilm presente nelle tubature degli impianti idraulici dell’acqua moltiplicazione della L. pneumophila. moltiplicazione della L. pneumophila.

5 Ricircolo dell’acqua e nebulizzazione dei getti d’acqua; Sistemi di produzione diretta di aerosol (docce e rubinetti) o indiretta (umidificatori a bolle di ossigeno connessi agli impianti per la respirazione assistita negli ospedali. Legionella pneumophila e ambiente

6 Torri di raffreddamento, sistemi di condizionamento dell’aria e umidificatori dell’aria nei sistemi di ventilazione. Legionella pneumophila e ambiente

7 Legionella pneumophila Meccanismo di patogenicità La caratteristica principale di patogenicità è la capacità di sopravvivere all’interno dei leucociti polimorfonucleati, dei monociti e dei macrofagi alveolari.

8  Pili: Permettono l’adesione del batterio alla cellula ospite.  MOMP (Proteina maggiore della membrana esterna) Si lega ai recettori presenti sui monociti e macrofagi. Si lega ai recettori presenti sui monociti e macrofagi. Legionella pneumophila Fattori di virulenza: Adesività

9 Legionella pneumophila Diagnosi  Esame microscopico  Esame colturale  Ricerca dell’antigene nelle urine  Ibridizzazione degli acidi nucleici  Ricerca degli anticorpi anti-L. pneumophila

10 Legionella pneumophila Esame microscopico Colorazione di Gram: le legionelle non si colorano bene con il Gram Colorazione di Gram: le legionelle non si colorano bene con il Gram Metodo di Gimenez: i microrganismi appaiono colorati in rosso su fondo blu-verde. Metodo di Gimenez: i microrganismi appaiono colorati in rosso su fondo blu-verde. Metodo di Dieterle (impregnazione argentica): per preparati istologici Metodo di Dieterle (impregnazione argentica): per preparati istologici Immunofluorescenza diretta Immunofluorescenza diretta

11 Legionella pneumophila Esame colturale  Campione biologico - Aspirato tracheale; - Aspirato tracheale; - Espettorato; - Espettorato; - Essudato pleurico; - Essudato pleurico; - Lavaggio bronchiale (3000 rpm x 30’); - Lavaggio bronchiale (3000 rpm x 30’); - Biopsia di parenchima polmonare; - Biopsia di parenchima polmonare; - Sangue. - Sangue.  Terreni di crescita - Agar estratto di lievito-carbone tamponato (CYE Agar) + - Agar estratto di lievito-carbone tamponato (CYE Agar) + α-chetoglutarato + pirofosfato ferrico (BCYE Agar). α-chetoglutarato + pirofosfato ferrico (BCYE Agar). Supplementi selettivi: Supplementi selettivi: - Cefamandolo, polimixina B e anisomicina (BMPA) - Cefamandolo, polimixina B e anisomicina (BMPA) - Glicina, polimixina B, anisomicina, vancomicina, blu di bromotimolo - Glicina, polimixina B, anisomicina, vancomicina, blu di bromotimolo e porpora di bromocresolo (MWY). e porpora di bromocresolo (MWY). - Glicina, polimixina B, vancomicina e cicloeximide (GVCP) - Glicina, polimixina B, vancomicina e cicloeximide (GVCP)

12 Legionella pneumophila Esame colturale  Incubazione: 35°C, 3-5% CO2 per 3-5 giorni.  Osservazione microscopica: nella colorazione del Gram si usa fucsina basica 0.1% invece di safranina. fucsina basica 0.1% invece di safranina.  Identificazione - Le colonie sospette vengono controllate per la dipendenza dalla - Le colonie sospette vengono controllate per la dipendenza dalla L-cisteina (non crescono in assenza di L-cisteina) L-cisteina (non crescono in assenza di L-cisteina) - Tipizzazione mediante antisieri specifici. - Tipizzazione mediante antisieri specifici.

13 Legionella pneumophila su BCYE agar