Stress Ossidativo.

Presentazione sul tema: "Stress Ossidativo."— Transcript della presentazione:

1 Stress Ossidativo

2 La produzione di ROS è catalizzata da metalli legati a proteine

3 Reazioni di Fenton e di Haber-Weiss
H2O2 + O2 SOD O2-• + Fe3+® Fe2+ + O2 Fe2+ + H2O2 ® OH- + Fe3+ + OH• _________________________________________________ O2-• + H2O2 ® OH- + O2 + OH• H2O + O2 Catalasi

4 Enzimi coinvolti nell’omeostasi dei ROS
Superossido dismutasi (Mn e Cu/Zn) Catalasi (Fe) Glutatione perossidasi (Se) Glutatione S-transferasi GSSG reduttasi (NADPH) NO sintasi (Fe)

5

6

7

8

9 Misura delle specie ossidanti intracellulari (ROS e RNS)

10

11

12 Transferrina

13 Transferrina Tyr192 HCO3- Asp60 Tyr92 His253

14 Stress ossidativo nel SNC
Pro-ossidanti Anti-ossidanti Catalasi SOD GSH Px; GSH Vitamine C / E Acido urico Ossigeno e glucosio PUFA Metalli di transizione

15 Perossidazione lipidica
PUFA (Es. ac. arachidonico) Posizione bis-allilica H H ·OH ·O – O·

16 da lipidi-idroperossido a HNE
O – OH O H OH

17 Addizione di HNE a proteine

18 Isoprostani

19 Ossidazione proteica Modificazione covalente di una proteina indotta da ROS o intermedi dello stress ossidativo

20 Ossidazione proteica Causata da: agenti chimici
(H2O2, Fe2+, Cu+, glutatione, HOCl, HOBr, 1O2, ONOO-) Fagociti attivati (oxidative burst activity) luce UV, ozono Lipidi idroperossidi (HNE, MDA, acroleina) Mitocondri (intermedi della catena respiratoria) Ossidoreduttasi Farmaci e loro metaboliti

21 Ossidazione proteica Cys e Met sono gli aminoacidi più suscettibili di ossidazione Possono essere reversibili se le cellule possiedono l’opportuno sistema enzimatico metionina solfossido reduttasi tioredossine, ecc. possibile funzione regolatoria “sacrificial scavengers”

22 Ossidazione proteica Aminoacidi ossidati da ioni metallici:
Pro (g-glutammilsemialdeide) Arg (g-glutammilsemialdeide) Lys (semialdeide amminoadipica) Thr (amminochetobutirrato)

23

24 DNPH - Oxyblot

25 Ossidazione proteica indotta da HOCl
Formazione di clorotirosine e ditirosine Dipende solo dalla mieloperossidasi, riflettendo l’attività di neutrofili e monociti E’ un marker dello stress ossidativo di tipo infiammatorio

26 Ossidazione proteica e perossidazione lipidica
Addizione covalente di HNE, MDA, acroleina a residui Lys, Cys e His Origine aspecifica, prevalentemente ioni metallici e radiazioni ionizzanti Importante nelle malattie neurodegenerative

27 Lewy bodies in cortical neurons of DLBD demonstrate hydroxynonenal (A) and carboxymethyllysine (B) immunoreactivity. Scale bar, 20 μm.