ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO Esercitatori
CONDIZIONI DI UTILIZZO PER LA PCR 30’’ 1’ 30’’’ 5’ 4°C 28 Cycles CONDIZIONI DI UTILIZZO PER LA PCR Thermal Cycler (2n-2n)x n= cycles number x= starting template DNA The integrity of PCR amplicons will be analyzed by electroforesis 2° DAY
ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO Permette la separazione di acidi nucleici in funzione delle loro dimensioni, della carica e della forma E’ una tecnica fondamentale per: 1_l’analisi (elettroforesi analitica); 2_la purificazione degli acidi nucleici (elettroforesi preparativa) 2° DAY
ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO catodo anodo ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO - + RNA e DNA sono carichi negativamente 2° DAY Gli acidi nucleici sono carichi negativamente ed in un campo elettrico migrano dal polo negativo verso il polo positivo.
ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO Effetto “setaccio” in un gel uniforme ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO Nell’elettroforesi gli acidi nucleici vengono sottoposti ad un campo elettrico (vengono “fatti migrare” o “correre”) all’interno di una matrice (gel di agarosio o poliacrilammide). - 2° DAY +
ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO L’agarosio è un polisaccaride, isolato da un’alga, costituito da residui alternati di D-galattosio e 3,6-anidro-L-galattosio. ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO L’elettroforesi in gel di agarosio consente la separazione di molecole di grandi dimensioni (100-20.000 paia basi). 2° DAY Risoluzione Concentrazione di agarosio 0.8% : 0.5 – 20 kb 2% : 0.1 – 3 kb
PROTOCOLLO GEL AGAROSIO 1% agarose gel in 1X TAE electroforesis buffer Run Time: 40 min. Voltage: 80 V Samples: 1/20 final Volume (5 l) + Loading buffer PROTOCOLLO GEL AGAROSIO 100V 0,2A Polo + Polo - 2° DAY
ON CORSA SU GEL AGAROSIO 100V 0,2A Polo - Polo + White 2° DAY UV
CORSA SU GEL DI AGAROSIO DEI PLASMIDI 3° DAY
NANODROP: Dosaggio Spetrofotometrico del DNA Plasmidico 3° DAY