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Vettori e clonaggio Clonaggio di un frammento di DNA = =produzione di molte copie identiche del frammento di DNA.

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Presentazione sul tema: "Vettori e clonaggio Clonaggio di un frammento di DNA = =produzione di molte copie identiche del frammento di DNA."— Transcript della presentazione:

1 Vettori e clonaggio Clonaggio di un frammento di DNA = =produzione di molte copie identiche del frammento di DNA

2 Vettori e clonaggio Il frammento di DNA viene inserito in una molecola-vettore che può replicarsi quando è inserita in una cellula ospite, di solito un batterio

3 Vettori e clonaggio -Enzimi di restrizione -DNA ligasi -Vettori

4 Vettori e clonaggio Sistema di restrizione/metilazione del DNA

5 Vettori e clonaggio Frammenti di restrizione del DNA genomico di adenovirus 2

6 Vettori e clonaggio Reazione ligasica di frammenti di restrizione

7 Vettori e clonaggio Vettori Plasmidi Fagi Cosmidi YAC BAC

8 Vettori e clonaggio Plasmide Molecola circolare di DNA a doppio filamento, normalmente presente nella cellula batterica, in grado di replicarsi autonomamente dal cromosoma.

9 Vettori e clonaggio

10 Replicazione di un plasmide

11 Vettori e clonaggio Clonaggio di un frammento di DNA in un plasmide

12 Vettori e clonaggio Formazione di un plasmide ricombinante

13 Vettori e clonaggio Il marker di selezione permette permette di selezionare le cellule batteriche contenenti il plasmide

14 Vettori e clonaggio Clonaggio in un plasmide e selezione su un terreno contenente un antibiotico

15 Vettori e clonaggio La possibilità di selezionare i batteri trasformati è molto importante perché la trasformazione batterica è un processo poco efficiente

16 Vettori e clonaggio Clonaggio di diversi frammenti di DNA in un plasmide

17 Vettori e clonaggio Regione di clonaggio (=polylinker): regione che contiene una copia di diversi siti di restrizione

18 Vettori e clonaggio

19 Lunghezza massima del DNA clonabile in un plasmide: circa 20 Kb

20 Vettori e clonaggio I virus sono piccoli parassiti non in grado di replicarsi. Dopo aver infettato una cellula-ospite utilizzano i suoi sistemi di replicazione e sintesi delle proteine per riprodursi

21 Vettori e clonaggio I batteriofagi (o fagi) sono virus che infettano i batteri.

22 Vettori e clonaggio Ciclo litico del fago T4

23 Vettori e clonaggio Il fago più utilizzato in biologia molecolare è il fago

24 Vettori e clonaggio Ciclo litico e lisogenico del fago

25 Vettori e clonaggio Assemblaggio di un fago

26 Vettori e clonaggio Mappa del genoma del fago

27 Vettori e clonaggio Clonaggio di frammenti di DNA nel fago

28 Vettori e clonaggio Formazione di cloni fagici

29 Vettori e clonaggio L’infezione dei batteri con il fago è circa 10 3 volte più efficiente della trasformazione con un plasmide

30 Vettori e clonaggio Lunghezza del DNA clonabile in un fago: Kb

31 Vettori e clonaggio Un cosmide è un plasmide contenente la sequenza COS dal fago

32 Vettori e clonaggio

33 Clonaggio di frammenti di DNA in un cosmide

34 Vettori e clonaggio Lunghezza del DNA clonabile in un cosmide: circa 45 Kb

35 Vettori e clonaggio YAC=yeast artificial chromosome

36 Vettori e clonaggio Dimostrazione sperimentale degli elementi funzionali di un cromosoma

37 Vettori e clonaggio Vettore YAC: sequenze ARS CEN TEL

38 Vettori e clonaggio

39 Lunghezza del DNA clonabile in uno YAC: fino a 1000 Kb

40 Vettori e clonaggio Approximate Maximum Length of DNA That Can Be Cloned in Vectors Vector Type Cloned DNA (kb) Plasmid λ phage Cosmid P1 phage BAC (bacterial artificial chromosome) YAC (yeast artificial chromosome)

41 Vettori e clonaggio Vettore di espressione

42 Vettori e clonaggio


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