=produzione di molte copie identiche del frammento di DNA

Presentazione sul tema: "=produzione di molte copie identiche del frammento di DNA"— Transcript della presentazione:

1 =produzione di molte copie identiche del frammento di DNA
Vettori e clonaggio Clonaggio di un frammento di DNA= =produzione di molte copie identiche del frammento di DNA

2 Il frammento di DNA viene inserito in una molecola-vettore
Vettori e clonaggio Il frammento di DNA viene inserito in una molecola-vettore che può replicarsi quando è inserita in una cellula ospite, di solito un batterio

3 -Enzimi di restrizione -DNA ligasi -Vettori
Vettori e clonaggio -Enzimi di restrizione -DNA ligasi -Vettori

4 Sistema di restrizione/metilazione
Vettori e clonaggio Sistema di restrizione/metilazione del DNA

5 Frammenti di restrizione del DNA genomico di adenovirus 2
Vettori e clonaggio Frammenti di restrizione del DNA genomico di adenovirus 2

6 Vettori e clonaggio Reazione ligasica di frammenti di restrizione

7 Vettori e clonaggio Vettori Plasmidi Fagi Cosmidi YAC BAC

8 Molecola circolare di DNA a doppio filamento, normalmente presente
Vettori e clonaggio Plasmide Molecola circolare di DNA a doppio filamento, normalmente presente nella cellula batterica, in grado di replicarsi autonomamente dal cromosoma.

9 Vettori e clonaggio

10 Replicazione di un plasmide
Vettori e clonaggio Replicazione di un plasmide

11 Vettori e clonaggio Clonaggio di un frammento di DNA in un plasmide

12 Vettori e clonaggio Formazione di un plasmide ricombinante

13 Il marker di selezione permette permette di selezionare le
Vettori e clonaggio Il marker di selezione permette permette di selezionare le cellule batteriche contenenti il plasmide

14 Clonaggio in un plasmide e selezione su un terreno contenente
Vettori e clonaggio Clonaggio in un plasmide e selezione su un terreno contenente un antibiotico

15 La possibilità di selezionare i batteri trasformati è molto
Vettori e clonaggio La possibilità di selezionare i batteri trasformati è molto importante perché la trasformazione batterica è un processo poco efficiente

16 Clonaggio di diversi frammenti di DNA in un plasmide
Vettori e clonaggio Clonaggio di diversi frammenti di DNA in un plasmide

17 Regione di clonaggio (=polylinker): regione che contiene una copia di
Vettori e clonaggio Regione di clonaggio (=polylinker): regione che contiene una copia di diversi siti di restrizione

18 Vettori e clonaggio

19 DNA clonabile in un plasmide:
Vettori e clonaggio Lunghezza massima del DNA clonabile in un plasmide: circa 20 Kb

20 I virus sono piccoli parassiti non in grado di replicarsi.
Vettori e clonaggio I virus sono piccoli parassiti non in grado di replicarsi. Dopo aver infettato una cellula-ospite utilizzano i suoi sistemi di replicazione e sintesi delle proteine per riprodursi

21 I batteriofagi (o fagi) sono virus che infettano i batteri.
Vettori e clonaggio I batteriofagi (o fagi) sono virus che infettano i batteri.

22 Vettori e clonaggio Ciclo litico del fago T4

23 Il fago più utilizzato in biologia
Vettori e clonaggio Il fago più utilizzato in biologia molecolare è il fago 

24 Vettori e clonaggio Ciclo litico e lisogenico del fago 

25 Vettori e clonaggio Assemblaggio di un fago 

26 Mappa del genoma del fago 
Vettori e clonaggio Mappa del genoma del fago 

27 Vettori e clonaggio Clonaggio di frammenti di DNA nel fago 

28 Formazione di cloni fagici
Vettori e clonaggio Formazione di cloni fagici

29 L’infezione dei batteri con il fago  è circa 103 volte più efficiente
Vettori e clonaggio L’infezione dei batteri con il fago  è circa 103 volte più efficiente della trasformazione con un plasmide

30 Lunghezza del DNA clonabile in un fago: 20-25 Kb
Vettori e clonaggio Lunghezza del DNA clonabile in un fago: 20-25 Kb

31 Un cosmide è un plasmide contenente la sequenza COS
Vettori e clonaggio Un cosmide è un plasmide contenente la sequenza COS dal fago 

32 Vettori e clonaggio

33 Vettori e clonaggio Clonaggio di frammenti di DNA in un cosmide

34 clonabile in un cosmide:
Vettori e clonaggio Lunghezza del DNA clonabile in un cosmide: circa 45 Kb

35 YAC=yeast artificial chromosome
Vettori e clonaggio YAC=yeast artificial chromosome

36 Dimostrazione sperimentale degli elementi funzionali di un cromosoma
Vettori e clonaggio Dimostrazione sperimentale degli elementi funzionali di un cromosoma

37 Vettori e clonaggio Vettore YAC: sequenze ARS CEN TEL

38 Vettori e clonaggio

39 Lunghezza del DNA clonabile in uno YAC: fino a 1000 Kb
Vettori e clonaggio Lunghezza del DNA clonabile in uno YAC: fino a 1000 Kb

40 Approximate Maximum Length of DNA That Can Be Cloned in Vectors
Vettori e clonaggio Approximate Maximum Length of DNA That Can Be Cloned in Vectors Vector Type Cloned DNA (kb) Plasmid 20 λ phage 25 Cosmid 45 P1 phage 100 BAC (bacterial artificial chromosome) 300 YAC (yeast artificial chromosome) 1000

41 Vettore di espressione
Vettori e clonaggio Vettore di espressione

42 Vettori e clonaggio