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Lespressione di un gene può essere controllata interferendo con la reazione di poliadenilazione La regolazione del gene che codifica per la proteina U1A.

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Presentazione sul tema: "Lespressione di un gene può essere controllata interferendo con la reazione di poliadenilazione La regolazione del gene che codifica per la proteina U1A."— Transcript della presentazione:

1 Lespressione di un gene può essere controllata interferendo con la reazione di poliadenilazione La regolazione del gene che codifica per la proteina U1A Esempio di regolazione on/off della reazione di taglio e poliadeniazione La proteina U1A e presente nellU1 snRNP, particella ribonucleoproteica coninvolta nel processo di splicing E in grado di legare una sequenza sul proprio pre-mRNA, a monte del sito di taglio e poliadenilazione, contenente due motivi di sequenza simili a quello a cui si lega sullU1 RNA. Quando il livello della proteina U1A supera i livelli cellulari dellU1 snRNA laccumulo della proteina viene bloccata! D D D D

2 1) La proteina U1A lega il piccolo RNA di splicing U1 snRNA e con esso forma la particella ribonucleoproteica U1 snRNP coninvolta nel processo di splicing Complesso della snRNP U1: sono evidenziati le proteine Sm all'estremità 3' e altre proteine specifiche del complesso. Il sito di legame di U1A richiede una sequenza di 7 nucleotidi del loop e 3 bp dello stern.

3 free RNA U1A - Il sequenziamento del gene codificante U1A ha rivelato la presenza al 3', vicino al sito di poliadenilazione (AUUAAA), di 2 sequenze simili a quella del sito di legame sull U1 snRNA. Il saggio di ritardo elettroforetico utilizzando lmRNA di U1A marcato in continuo e quantità crescenti della proteina U1A conferma la presenza di due siti di legame per la proteina sul proprio messaggero 2) U1A è in grado di legare il 3 UTR del proprio pre-mRNA. Questa sequenza si trova a monte del sito di taglio e poliadenilazione.

4 Al contrario lutilizzo di un RNA già tagliato e quindi con un 3' OH libero, all'aumentare della proteina U1A la reazione di poliadenilazione era sempre più inibita. U1A WT - input U1A U1A Inverted poly(A) + 3) Quando il livello della proteina U1A supera i livelli cellulari dellsnRNA U1 la produzione della proteina viene bloccata! 4) Il controllo su U1A è quindi di tipo a feedback ed ha come target la corretta formazione del 3' del suo messaggero. Man mano che la quantità di U1A nel nucleo aumenta, questa si va a legare al 3' del proprio mRNA impedendo la poliadenilazione e di conseguenza destabilizzando il trascritto che viene degradato. In estratti contenenti i fattori di taglio e poliadenilazione e contemporaneamente EDTA, quindi viene inibita la reazione di poliadenilazione del pre-mRNA, si osservava un andamento inalterato delle reazioni di taglio. La proteina non blocca il taglio, bensì la poliadenilazione

5 U1A interagisce specificamente con la parte Cterminale di PAP, in un domino specifico che inibisce il suo normale funzionamento. Questa interazione è stata dimostrata con la tecnica del two hybrid in lievito. E' da notare inoltre che la sequenza del sito di poliadenilazione (AUUAAA) è un sito sub-canonico: in tal modo si ha un legame meno stabile con CPSF che può essere più facilmente scalzato. U1A interagisce specificamente con la parte Cterminale di PAP un sito sub-canonico

6 Formazione dellestremità 3 del pre-mRNA degli istoni

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8 U7 snRNA Pre-mRNA per gli istoni Formazione dellestremità 3 del pre-mRNA degli istoni


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