La presentazione è in caricamento. Aspetta per favore

La presentazione è in caricamento. Aspetta per favore

TECNICHE DI VOLTAGE-CLAMP A DUE ELETTRODI TECNICA DEL PATCH-CLAMP REGISTRAZIONI CON MATRICI DI ELETTRODI STRUTTURA E FUNZIONE DEL RECETTORE IONOTROPO PER.

Presentazioni simili


Presentazione sul tema: "TECNICHE DI VOLTAGE-CLAMP A DUE ELETTRODI TECNICA DEL PATCH-CLAMP REGISTRAZIONI CON MATRICI DI ELETTRODI STRUTTURA E FUNZIONE DEL RECETTORE IONOTROPO PER."— Transcript della presentazione:

1 TECNICHE DI VOLTAGE-CLAMP A DUE ELETTRODI TECNICA DEL PATCH-CLAMP REGISTRAZIONI CON MATRICI DI ELETTRODI STRUTTURA E FUNZIONE DEL RECETTORE IONOTROPO PER LACh STRUTTURA E FUNZIONE DEI CANALI IONICI VOLTAGGIO DIPENDENTI

2 TECNICHE DI VOLTAGE-CLAMP Permettono di: misurare i flussi di ioni attraverso la membrana come corrente elettrica, mentre la differenza di potenziale ai sui capi è mantenuta costante per mezzo di un amplificatore a retroazione (FBA) separare la componente di corrente ionica da quella capacitiva ottenere informazioni sul funzionamento dei canali ionici (permeabilità e gating)

3 In esperimenti di voltage-clamp il voltaggio ai capi della membrana è forzato a variare il più rapidamente possibile da un valore stazionario ad un altro valore sempre stazionario: si applica alla membrana un gradino di potenziale. Quando V varia si osserva un rapido flusso di corrente capacitiva di natura transiente, ma quando V è stazionario la corrente è puramente ionica perchè I c = C dV/dt = 0

4

5 Per ogni particolare preparato cellulare la condizione di voltage-clamp si verifica quando vengono garantite le seguenti condizioni: un accurato controllo del voltaggio unadeguata velocità lisopotenzialità dellarea di membrana da cui si registra la corrente (space clamp)

6

7 Misura V m, (alta resistenza dingresso) con guadagno A, confronta V m con il potenziale di comando E; se la differenza fra V m ed E è diversa da zero invia corrente I attraverso la resistenza daccesso R a (elettrodo e citoplasma) Si può dimostrare che quindi maggiore è A, guadagno dellampificatore, più V m approssima E e leffetto della resistenza dingresso diventa trascurabile

8

9

10 METODI DI SEPARAZIONE DELLE CORRENTI Sostituzione ionica Separazione farmacologica Protocolli di impulsi di voltaggio

11 SOSTITUZIONE IONICA

12 SEPARAZIONE FARMACOLOGICA

13

14 PROTOCOLLI DI IMPULSI DI VOLTAGGIO

15

16

17 TECNICA DEL PATCH-CLAMP Permette la registrazione con alta risoluzione (fino a livello di singolo canale) di: correnti in pezzi di membrana della cellula (cell-attached) correnti in pezzi di membrana isolati dalla cellula (excised membrane patches: inside-out, outside-out) correnti e potenziali in cellule di piccole dimensioni (whole-cell current-clamp e voltage-clamp)

18

19

20 Convertitore corrente-voltaggio La corrente in ingresso è = alla corrente di feedback

21

22

23

24

25

26 Intracellular messenger

27 intracellular messengers antibodies peptides

28 extracellular messengers antibodies peptides


Scaricare ppt "TECNICHE DI VOLTAGE-CLAMP A DUE ELETTRODI TECNICA DEL PATCH-CLAMP REGISTRAZIONI CON MATRICI DI ELETTRODI STRUTTURA E FUNZIONE DEL RECETTORE IONOTROPO PER."

Presentazioni simili


Annunci Google