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U.O.C. di Chirurgia Vascolare ed Endovascolare Direttore Dott.F. Magnacca Scuola di Specializzazione di Chirurgia Vascolare Direttore Prof. S. Ucchino.

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1 U.O.C. di Chirurgia Vascolare ed Endovascolare Direttore Dott.F. Magnacca Scuola di Specializzazione di Chirurgia Vascolare Direttore Prof. S. Ucchino Chieti MicroRNA-27b e -133a nelle placche aterosclerotiche in pazienti affetti da ipercolesterolemia F. Guarini, A. Cambiaghi, V. Scaletta, A. Palmieri, F. Magnacca, S. Ucchino

2 MicroRNA: what? Sequenze brevi (19-25 nucleotidi) di RNA non codificante endogeno Molecole altamente conservate, ritrovate in tutti i tipi cellulari (alcune tessuto-specifiche) Classe di modulatori post-trascrizionale dellespressione genica Attualmente sono stati identificati 1100 diversi microRNA Ruolo definito in diversi processi fisiologici (crescita cellulare, metabolismo, risposta immunitaria) e patologici (neoplasie, autoimmunitari, cardiovascolari)

3 MicroRNA: biologia e meccanismo dazione Sequenza complementare di mRNA nella regione non tradotta 3UTR bersaglio provocandone il clivaggio o la repressione della traduzione in proteina Codificati da sequenze esoniche ed introniche attraverso la RNA polimerasi II Via Classica: - Pri-miRNA clivato da endonucleasi Drosha - Pre-miRNA trasportato nel citoplasma da Esportina 5 Via Alternativa: -Pre-miRNA tradotto da sequenze mirtroniche e trasportato nel citoplasma da Esportina 5 Clivaggio in sequenze nucleotidiche brevi da parte dellenzima Dicer e formazione del miRNA maturo

4 MicroRNA e biologia vascolare microRNAs are key regulator of vessel biogenesis: studies on Dicer-knockout mice have shown an interruption in angiogenes Yang WJ, et al. Journal of Biological Chemistry 2005 microRNAs are expressed in rats carotid and some of them were misexpressed after vascular injury Ji R, et al. Circulation Research 2007 microRNAs are widely expressed in cardiovascular system Small EM, et al. Circulation 2010 microRNAs are expressed in human carotid plaques and the expression profile may identify vulnerable ones Cipollone F, et al. Stroke 2011

5 Obiettivi 1. Individuare microRNA disregolati nelle placche aterosclerotiche in pazienti affetti da ipercolesterolemia 2. Valutare la correlazione tra lespressione dei microRNA individuati e lipercolesterolemia

6 Materials and methods: step one Pazienti asintomatici sottoposti a tromboendoarterectomia carotidea per stenosi severa (>70%) del tratto extracranico della carotide interna normocolesterolemici (LDL-C < 100 mg/dL) n=11 ipercolesterolemici (LDL-C >160 mg/dL) n= 11

7 Materials and Methods Le placche aterosclerotiche prelevate mediante TEA carotidea sono state congelate in azoto liquido e conservate a -80°C

8 Materials and Methods Raggruppati 2 pool dalle sezioni delle placche carotidee Lavorazione con mortaio e pestello a -80°C Analisi micro-array

9 MicroRNA-133 a e -27 b -133 a -27 b Metabolismo lipidico (PPAR-gamma, RXR-alfa, CD36, SBREP-1c, ABCA-1) Neoangiogenesi (TSP-1, semaphorin-6a) Degradazione del collagene (MMP-2, MMP-9, MMP-13) Modulazione della proliferazione VSMCs Degradazione del collagene (MMP-2, MMP-9, MMP-13) Modulatore del PAI-1 (inibizione fibrinolisi)

10 Hypercholesterolemic Group Control Groupp-value N1615 Sex (M/F)12/410\5ns Age (yr)75,6±8,076,5±4,7ns BMI (Kg/m 2 )25,9±3,025,1±3,8ns TC (mg/dL)252,5±25,8170,3±19,3<0,0001 HDL-c (mg/dL)54,2±12,553,3±16,4ns Tg (mg/dL)130,3±41,2151,5±83,3ns LDL-c (mg/dL)172,1±20,586,7±25,6<0,0001 Vessel Stenosis (%)79,0±7,878,3±8,2ns Hypertension913ns Diabetes00ns History of IHD45ns Smokers22ns Study Population

11 Materials and Methods: step two mir-222 Estrazione RNA Real time- PCR

12 MicroRNA-133a e ipercolesterolemia P=0,038

13 MicroRNA-27b e ipercolesterolemia P=0,009

14 Conclusioni 1. Primo passo verso lindividuazione dei meccanismi molecolari che conducono allinstabilità della placca aterosclerotica 1. Individuare i pazienti a rischio per levoluzione di una placca complicata

15 Grazie per lattenzione


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