FACOLTA’ DI SCIENZE FF MM NN – CHIMICA ANALITICA CON APPLICAZIONI CLINICHE L’approccio genomico non tiene conto di modificazioni post-traduzionali.

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1 FACOLTA’ DI SCIENZE FF MM NN – CHIMICA ANALITICA CON APPLICAZIONI CLINICHE L’approccio genomico non tiene conto di modificazioni post-traduzionali

2 FACOLTA’ DI SCIENZE FF MM NN – CHIMICA ANALITICA CON APPLICAZIONI CLINICHE APPROCCIO PROTEOMICO

3 FACOLTA’ DI SCIENZE FF MM NN – CHIMICA ANALITICA CON APPLICAZIONI CLINICHE PREFRAZIONAMENTO 1-Estrazione differenziale 2-Frazionamento subcellulare 3-Cromatografia

4 FACOLTA’ DI SCIENZE FF MM NN – CHIMICA ANALITICA CON APPLICAZIONI CLINICHE PREFRAZIONAMENTO:ESEMPIO 1

5 FACOLTA’ DI SCIENZE FF MM NN – CHIMICA ANALITICA CON APPLICAZIONI CLINICHE PREFRAZIONAMENTO:ESEMPIO 2

6 FACOLTA’ DI SCIENZE FF MM NN – CHIMICA ANALITICA CON APPLICAZIONI CLINICHE PREFRAZIONAMENTO:ESEMPIO 3

7 FACOLTA’ DI SCIENZE FF MM NN – CHIMICA ANALITICA CON APPLICAZIONI CLINICHE PREFRAZIONAMENTO:ESEMPIO

8 FACOLTA’ DI SCIENZE FF MM NN – CHIMICA ANALITICA CON APPLICAZIONI CLINICHE ANALISI PROTEOMICA: TECNOLOGIE

9 FACOLTA’ DI SCIENZE FF MM NN – CHIMICA ANALITICA CON APPLICAZIONI CLINICHE ELETTROFORESI BIDIMENSIONALE Efficace procedura di preparazione del campione Proteine denaturate e solubili (urea, Detergenti,…) 1° dimensione : Fino a 4 mg di proteine totali per strip Il campione viene comunementepre- adsorbito sulle strip durante la loro reidratazione, permettendo anche alle HMW proteins di entrare nel gel. Questo processo dura almeno 11 ore, dopodichè si può passare alla focalizzazione Durante la corsa elettroforeticala conduttività del gel cambia dipendentemente dal numero di specie cariche, diminuendo mano a mano che le varie specie si focalizzano. 2° dimensione: La transizione dalla prima alla seconda dimensione coinvolge l’equilibrazione della striscia focalizzata in tampone contenente SDS, la deposizione di essa sul gel di corsa e l’inglobamento in un gel di agarosio. COLORAZIONE

10 FACOLTA’ DI SCIENZE FF MM NN – CHIMICA ANALITICA CON APPLICAZIONI CLINICHE COLORAZIONE PROTEINE

11 FACOLTA’ DI SCIENZE FF MM NN – CHIMICA ANALITICA CON APPLICAZIONI CLINICHE COLLEGAMENTO A BANCHE DATI

12 FACOLTA’ DI SCIENZE FF MM NN – CHIMICA ANALITICA CON APPLICAZIONI CLINICHE COLLEGAMENTO A BANCHE DATI COMPARAZIONE CON 2D IN BANCA DATI

13 FACOLTA’ DI SCIENZE FF MM NN – CHIMICA ANALITICA CON APPLICAZIONI CLINICHE Detection of protein alterations in male breast cancer using 2D-gel electrophoresis and mass spectrometry.The involvement of several pathways in tmorogenesis K. Chahed et al. Clinica Chimica Acta (2007) ANALISI DIFFERENZIALE N=normale T=tumore

14 FACOLTA’ DI SCIENZE FF MM NN – CHIMICA ANALITICA CON APPLICAZIONI CLINICHE Detection of protein alterations in male breast cancer using 2D-gel electrophoresis and mass spectrometry.The involvement of several pathways in tmorogenesis K. Chahed et al. Clinica Chimica Acta (2007) ANALISI DIFFERENZIALE

15 FACOLTA’ DI SCIENZE FF MM NN – CHIMICA ANALITICA CON APPLICAZIONI CLINICHE ANALISI DEL GEL

16 FACOLTA’ DI SCIENZE FF MM NN – CHIMICA ANALITICA CON APPLICAZIONI CLINICHE IDENTIFICAZIONE DELLO SPOT

17 FACOLTA’ DI SCIENZE FF MM NN – CHIMICA ANALITICA CON APPLICAZIONI CLINICHE IDENTIFICAZIONE DELLO SPOT

18 FACOLTA’ DI SCIENZE FF MM NN – CHIMICA ANALITICA CON APPLICAZIONI CLINICHE IDENTIFICAZIONE DELLO SPOT

19 FACOLTA’ DI SCIENZE FF MM NN – CHIMICA ANALITICA CON APPLICAZIONI CLINICHE

20

21 TECNICHE MS E POTENZIALITA’

22 FACOLTA’ DI SCIENZE FF MM NN – CHIMICA ANALITICA CON APPLICAZIONI CLINICHE PROTEIN MICROARRAY

23 FACOLTA’ DI SCIENZE FF MM NN – CHIMICA ANALITICA CON APPLICAZIONI CLINICHE PROTEOMICA CON SELDI-TOF SELDI= Surface-Enanched Laser Desorption-Ionization Time-of-Flight Mass-Spectometer

24 FACOLTA’ DI SCIENZE FF MM NN – CHIMICA ANALITICA CON APPLICAZIONI CLINICHE PROTEOMICA CON SELDI-TOF