La presentazione è in caricamento. Aspetta per favore

La presentazione è in caricamento. Aspetta per favore

Università di Modena e Reggio Emilia MicroRNA and Lung Cancer CLINICA DI MALATTIE DELLAPPARATO RESPIRATORIO Università degli Studi di Modena e Reggio Emilia.

Presentazioni simili


Presentazione sul tema: "Università di Modena e Reggio Emilia MicroRNA and Lung Cancer CLINICA DI MALATTIE DELLAPPARATO RESPIRATORIO Università degli Studi di Modena e Reggio Emilia."— Transcript della presentazione:

1 Università di Modena e Reggio Emilia MicroRNA and Lung Cancer CLINICA DI MALATTIE DELLAPPARATO RESPIRATORIO Università degli Studi di Modena e Reggio Emilia Università degli Studi di Modena e Reggio Emilia Journal Club

2 Università di Modena e Reggio Emilia CLINICA DI MALATTIE DELLAPPARATO RESPIRATORIO Università degli Studi di Modena e Reggio Emilia MicroRNA and Lung Cancer Matthias Eder, Michaela Scherr New Engl J Med 2005; June 9; 23:

3 Università di Modena e Reggio Emilia MicroRNA and Lung Cancer RAS e tumore polmonare RAS e tumore polmonare microRNA: definizione e funzione microRNA: definizione e funzione Ruolo dei microRNA nel tumore polmonare Ruolo dei microRNA nel tumore polmonare

4 Università di Modena e Reggio Emilia MicroRNA and Lung Cancer RAS e tumore polmonare RAS e tumore polmonare microRNA: definizione e funzione microRNA: definizione e funzione Ruolo dei microRNA nel tumore polmonare Ruolo dei microRNA nel tumore polmonare

5 LA TRASFORMAZIONE NEOPLASTICA Oncogeni OncosoppressoriOn OffOncosoppressori Oncogeni Off On 1)Mutazioni puntiformi 2)Amplificazione genica 3)Traslocazioni cromosomiche 4)delezioni ONCOGENE: carattere dominante ONCOSOPPRESSORE: carattere recessivo

6 Chronology of genetic and molecular lesions C.Brambilla; Eur Respir J 2003; 21 Suppl.39, 36s-44s Normal Hyperplasia Metaplasia Dysplasia ISC Carcinoma 3p-9p-17p- Aneuploidy P53 mut Ras mut Telomerase + FHIT Rb

7 MAJOR MOLECULAR ALTERATIONS IN LUNG CANCER Proto-oncogenes and growth stimulation Putative autocrine loops GRP/GRP receptor HGF/MET SCF/KIT NDF/ERBB RAS mutation < MYC amplification Other molecular changes BCL-2 expression Telomerase activity SCLC (%)NSCLC (%) Clinics in chest medicine, march 2002 vol.23; n1:83

8 Codifica per 3 proteine di 21-kD (H-Ras, N-Ras, K-Ras) che allo stato attivo legano GTP e allo stato inattivo legano GDP Codifica per 3 proteine di 21-kD (H-Ras, N-Ras, K-Ras) che allo stato attivo legano GTP e allo stato inattivo legano GDP Ruolo di GTPasi intrinseca a ras (p21 ) nel ritorno allo stato di quiescenza della proteina Ruolo di GTPasi intrinseca a ras (p21 ) nel ritorno allo stato di quiescenza della proteina Attivazione delloncogene K-ras mediante mutazione puntiforme al codone 12 (occasionalmente: 13 e 61) avviene nel 30% degli adenocarcinomi del polmone Attivazione delloncogene K-ras mediante mutazione puntiforme al codone 12 (occasionalmente: 13 e 61) avviene nel 30% degli adenocarcinomi del polmone La mutazione è correlata allabitudine tabagica La mutazione è correlata allabitudine tabagica Am J Respir Crit Car Med vol 161.pp , 2000 RAS ras

9 MUTAZIONE DI KRAS Inactive KRAS active KRAS Inactive KRAS GDP GTP GDP GAP Downstream signal transduction cascade + Mutant KRAS active + GTP GAP Drugs that block specific downstream signals Drugs that inhibit mutant KRAS expression or function Clinics in Chest Medicine, march 2002 Vol 23 n°1:83

10 Ras e stimoli proliferativi Ras PDGFREGFR AF-6RGLPI3KRafRin1MekkNore1 Gap Junctions PLDAkt MAPK BCRJNK? Effetti biologici Integrine GPCR IL-2R Cellular Signalling 2000; 12:

11 Mutazione di K-RAS identificata in circa il 30% degli adenocarcinomi polmonari Mutazione di K-RAS identificata in circa il 30% degli adenocarcinomi polmonari Associata a riduzione della sopravvivenza nei pazienti affetti da neoplasia polmonare NSCLC Associata a riduzione della sopravvivenza nei pazienti affetti da neoplasia polmonare NSCLC la presenza di mutazione di K-RAS è associata a resistenza al trattamento con gefitinib la presenza di mutazione di K-RAS è associata a resistenza al trattamento con gefitinib Journal of Clinica Oncol 2005;23: RAS

12 Università di Modena e Reggio Emilia MicroRNA and Lung Cancer RAS e tumore polmonare RAS e tumore polmonare microRNA: definizione e funzione microRNA: definizione e funzione Ruolo dei microRNA nel tumore polmonare Ruolo dei microRNA nel tumore polmonare

13 MicroRNA Università di Modena e Reggio Emilia Piccoli frammenti di RNA (lunghezza nucleotidi) non codificanti Regolazione negativa della trascrizione genica mediante ibridazione a sequenze complementari nella regione 3 (3UTR) del mRNA target Meccanismo simile nelle piante e negli animali Alcuni miRNA sono alterati nelle neoplasie

14 MicroRNA: sintesi RISC: RNA-induced silencing complex Nature 2005;435:

15 Università di Modena e Reggio Emilia Interazione tra microRNA e mRNA target Journal of Cell Biology 2002; 156:17-21

16 Cell 2004; 116: Funzione dei microRNA RISC RISC 3 UTR mRNA Clivaggio dellmRNA Inibizione della trascrizione proteica microRNA microRNA

17 Copyright ©2004 by the National Academy of Sciences Calin, George Adrian et al. (2004) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101, Fig. 1. Correlation between FRAs and miRs Sito fragile:regione cromosomica soggetta a rottura spontanea o indotta

18 Copyright ©2004 by the National Academy of Sciences Calin, George Adrian et al. (2004) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101, Fig. 3. MiRs as cancer players

19 Università di Modena e Reggio Emilia MicroRNA and Lung Cancer RAS e tumore polmonare RAS e tumore polmonare microRNA: definizione e funzione microRNA: definizione e funzione Ruolo dei microRNA nel tumore polmonare Ruolo dei microRNA nel tumore polmonare

20 Università di Modena e Reggio Emilia Let-7 lethal-7 (let-7) è un membro della famiglia dei miRNA lethal-7 (let-7) è un membro della famiglia dei miRNA La mutazione di let-7 non permette luscita dal ciclo cellulare comportando divisione delle cellule in modelli sperimentali La mutazione di let-7 non permette luscita dal ciclo cellulare comportando divisione delle cellule in modelli sperimentali Nelluomo sono stati identificati geni codificanti per let-7 che mappano regioni delete nelle neoplasie Nelluomo sono stati identificati geni codificanti per let-7 che mappano regioni delete nelle neoplasie la iperespressione di let-7 ha inibito la cerscita di linee cellulari di tumore polmonare la iperespressione di let-7 ha inibito la cerscita di linee cellulari di tumore polmonare

21 Università di Modena e Reggio Emilia microRNA e tumore polmonare Takamizawa J. Reduced expression of the let-7 microRNA in human lung cancer in association with shortened postoperative survival. Cancer Res 2004; 64: Takamizawa J. Reduced expression of the let-7 microRNA in human lung cancer in association with shortened postoperative survival. Cancer Res 2004; 64: Johnson SM. RAS is regulated by the let-7 microRNA family. Cell 2005;120: Johnson SM. RAS is regulated by the let-7 microRNA family. Cell 2005;120:

22 Università di Modena e Reggio Emilia microRNA e tumore polmonare Takamizawa J. Reduced expression of the let-7 microRNA in human lung cancer in association with shortened postoperative survival. Cancer Res 2004; 64: Takamizawa J. Reduced expression of the let-7 microRNA in human lung cancer in association with shortened postoperative survival. Cancer Res 2004; 64: Johnson SM. RAS is regulated by the let-7 microRNA family. Cell 2005;120: Johnson SM. RAS is regulated by the let-7 microRNA family. Cell 2005;120:

23 Analisi della espressione di let-7 nel tumore polmonare Northen blot in linee cellulari di neoplasie polmonari Northen blot in neoplasie polmonari in vivo HNLEC = human normal lung epithelial cell lines 20 linee cellulari di neoplasia polmonare 5S rRNA = controllo Takamizawa J; Cancer Reesearch 2004; 64: Takamizawa J; Cancer Reesearch 2004; 64:

24 Sopravvivenza di NSCLC in base allespressione di let NSCLC Real-Time Reverse Transcription-PCR Hierarchical Clustering cDNA primer 105 adk Takamizawa J; Cancer Reesearch 2004; 64: Takamizawa J; Cancer Reesearch 2004; 64:

25 Università di Modena e Reggio Emilia microRNA e tumore polmonare Takamizawa J. Reduced expression of the let-7 microRNA in human lung cancer in association with shortened postoperative survival. Cancer Res 2004; 64: Takamizawa J. Reduced expression of the let-7 microRNA in human lung cancer in association with shortened postoperative survival. Cancer Res 2004; 64: Johnson SM. RAS is regulated by the let-7 microRNA family. Cell 2005;120: Johnson SM. RAS is regulated by the let-7 microRNA family. Cell 2005;120:

26 LA PRESENZA DI let-7 INFLUENZA LA ESPRESSIONE DI RAS Cellule HeLa let-7 + transfettate con oligonucleotidi antisenso inibenti Quantificazione della immunofluorescenza di RAS Cellule HepG2 trasfettate con let-7 Quantificazione della immunofluorescenza di RAS Controllo negativo

27 Università di Modena e Reggio Emilia let-7 E SCARSAMENTE ESPRESSO NEL TUMORE POLMONARE NAT: normal adjacent tissue Northen blot 20 neoplasie:polmone, colon,mammella 3 Ca squamocellulari

28 Eder, M. et al. N Engl J Med 2005;352: MicroRNA-Mediated Regulation of RAS Expression in Caenorhabditis elegans and Humans

29 Università di Modena e Reggio Emilia MicroRNA and Lung Cancer: Conclusioni MicroRNA hanno ruolo fondamentale nella regolazione della espressione proteica MicroRNA hanno ruolo fondamentale nella regolazione della espressione proteica let-7 è in grado di inibire la trascrizione di RAS let-7 è in grado di inibire la trascrizione di RAS Nel tumore polmonare è presente una ridotta espressione di let-7 Nel tumore polmonare è presente una ridotta espressione di let-7 Lassenza di let-7 si associa ad una iperespressione di RAS e ad un peggioramento della prognosi nel tumore polmonare Lassenza di let-7 si associa ad una iperespressione di RAS e ad un peggioramento della prognosi nel tumore polmonare Possibilità di terapia genica in futuro? Possibilità di terapia genica in futuro?

30 Università di Modena e Reggio Emilia MicroRNA and Lung Cancer RAS e tumore polmonare RAS e tumore polmonare microRNA: definizione e funzione microRNA: definizione e funzione Ruolo dei microRNA nel tumore polmonare Ruolo dei microRNA nel tumore polmonare

31 Università di Modena e Reggio Emilia MicroRNA and Lung Cancer CLINICA DI MALATTIE DELLAPPARATO RESPIRATORIO Università degli Studi di Modena e Reggio Emilia Università degli Studi di Modena e Reggio Emilia Journal Club

32 MicroRNA AND Lung Cancer Università di Modena e Reggio Emilia

33 RUOLO DELLA FARNESILTRANSFERASI NELLA ATTIVAZIONE DI RAS CANCER RESEARCH 63, , september 15; 2003 Cell Membrane RAS CAAX RAS CAAX RAS c AAX COCH 3 Lys lys K RAS N RAS H RAS PTI Competitive inhibitor of prenyltransferase P-P Prenyltransferase + isoprenyl-pyrophosphate Isoprenyl group Proteolysis (Rce-1)


Scaricare ppt "Università di Modena e Reggio Emilia MicroRNA and Lung Cancer CLINICA DI MALATTIE DELLAPPARATO RESPIRATORIO Università degli Studi di Modena e Reggio Emilia."

Presentazioni simili


Annunci Google