MARCATORI MOLECOLARI DEL DNA E SIDS

Presentazione sul tema: "MARCATORI MOLECOLARI DEL DNA E SIDS"— Transcript della presentazione:

1 MARCATORI MOLECOLARI DEL DNA E SIDS
Francesco Nonnis Marzano Dipartimento di Biologia Evolutiva e Funzionale Università di Parma

2 Fattori di rischio ambientale

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4 IN AMBITO FAMILIARE 1 morte inattesa=tragedia 2 morti inattese=sospette 3 morti inattese=omicidio 2 generazioni precedenti: 5 SIDS

5 Lenoir Calenda et al. (2000). Medical Hypotheses 54: 408-411
EREDITA’ AUTOSOMICA DOMINANTE A PENETRANZA INCOMPLETA

6 Auckland, Nuova Zelanda (2000)
1 lavoro Firenze, Italia (2002) 4 lavori Edmonton, Canada (2004) 4 lavori Yokohama, Giappone (2006) 12 lavori

7 STORICAMENTE CITOGENETICA GENETICA MOLECOLARE
Machin (1974). Chromosome and perinatal death. Lancet GENETICA MOLECOLARE Ding et al. (1991). G985 mutation in MCAD. New Eng. J. Med. Schwartz et al. (2000). SCN5A and LQTS. New Engl. J. Med. Narita et al. (2001). Serotonin gene and SIDS. Pediatrics Opdal et al. (2003). IL-10 and SIDS. Hum. Immunol. Weese Mayer et al. (2004). ENS and SIDS. Ped. Research.

8 SIDS: Does a gene exist?

9 Opdal e Rognum (2004); Hunt (2005)
GENETICA e SIDS Opdal e Rognum (2004); Hunt (2005) MCAD SCN5A KVLQT HERG KCNE1 KCNE2 Canali del sodio Canali del potassio 5-HTTLPR IL-10 C4A C4B HLA-DR2 mtDNA hsp 1. MUTAZIONI 2. POLIMORFISMI MALATTIE GENETICHE MORTE PREDISPOSIZIONE - INTERAZIONE CON AMBIENTE

10 Copyright ©2004 American Academy of Pediatrics

11 ESTRAZIONE E PURIFICAZIONE DNA
15 casi SIDS 10 prelievi autoptici in etanolo 5 inclusi in paraffina 22 controlli sangue intero

12 ANALISI GENETICHE AMPLIFICAZIONE PCR PCR E SEQUENZIAMENTO Serotonina
MAO-A 5-HTT GSTT GSTM Serotonina MCAD SCN5A TPH-2 Metabolismo lipidi Serotonina QT lungo Detossificazione Serotonina Detossificazione

13 Copyright ©2004 American Academy of Pediatrics

14 MCAD – AcilCoA Deidrogenasi a Catena Media
GAA = Deficit MCAD AAA = Sano

15

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17 AAA GTG GTA

18 MCAD – AcilCoA Deidrogenasi a Catena Media
Mutazione puntiforme A985G FREQUENZA OMOZIGOTI Italia 1/ nati vivi Australia 1/ nati vivi USA 1/28.000 Nord Europa 1/ –

19 SCN5A (LQT3) – Canale del sodio voltaggio dipendente
Ali et al. (2000). American Journal of Cardiology 85: Sonno Gene pb 28 Esoni Proteina di 2016 AA

20 SCN5A – Mutazioni puntiformi Esone 16

21 Nessuna mutazione

22 SEROTONINA (5 Idrossitriptamina)
Neuroni serotoninergici esercitano effetto modulatorio su: FUNZIONALITA’ CARDIOVASCOLARE TONO MUSCOLARE RITMO RESPIRATORIO TERMOREGOLAZIONE RITMI CIRCADIANI REGOLAZIONE SONNO STATI COMPORTAMENTALI

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24 TPH-2 TRIPTOFANO IDROSSILASI
Mutazione G1463A perdita 80% della funzionalità enzimatica

25 5-HTT (SERT) – Trasportatore della serotonina
Polimorfismi della regione del promotore Allele S (Short) Allele L (Long) Allele XL (extra long) Asiatici

26 5-HTT (SERT) – Trasportatore della serotonina

27 5-HTT (SERT) – Genotipi Eterozigoti L/S Omozigoti L/L S/S

28 Controllo 1 Controllo 2 Controllo 3
SERT (5-HTT) – Trasportatore della serotonina SIDS 1 SIDS 2 SIDS 3 SIDS 4 Controllo 1 Controllo 2 Controllo 3 Short/Long eterozigote Long/Long omozigote Short/Long eterozigote Tutti eterozigoti

29 5-HTT : TRASPORTATORE DELLA SEROTONINA
SIDS Controlli n= n=22 Genotipo L/L % % Genotipo S/L % % Genotipo S/S % % 5-HTT FREQUENZE ALLELICHE SIDS Controlli 79% (n=15) % (n=22) Frequenza allele L 28% (n=27) 14% (n=115) Narita et al. (2001) DATI BIBLIOGRAFICI 73% (n=87) 35% (n=100) Weese Mayer et al. (2003)

30 TRASPORTATORE DELLA SEROTONINA
DISTURBI DEPRESSIVI MAGGIORI Genotipo S/S INSONNIA GENOTIPO 5 HTT = Short/Short Short sleeping e frequenti risvegli

31 SIDS Genotipo L/L IPERSONNIA DEFICIT DI AROUSAL

32 7 SIDS GENOTIPO L/L 6 IPOPLASIA NUCLEO ARCUATO

33 MODELLO DEL TRIPLO RISCHIO
Kinney e Filiano Critical period of development Pre/Postnatal vulnerability 5-HTT MAO-A SIDS Exogenous postnatal stressor

34 MAO-A Monoaminoossidasi A
PROMOTORE REGIONE CODIFICANTE 5’ 3’ 3’ 5’ PROMOTORE REGIONE CODIFICANTE 5’ 3’ 3’ 5’ PROMOTORE REGIONE CODIFICANTE 5’ 3’ 3’ 5’ PROMOTORE REGIONE CODIFICANTE 5’ 3’ 3’ 5’

35 MAO-A L/L

36 Istituto di Anatomia Patologica Università di Milano
In collaborazione con Istituto di Anatomia Patologica Università di Milano Dipartimento di Scienze Ginecologiche-Ostetriche e di Neonatologia Università di Parma

37 AMPLIFIED FRAGMENT LENGTH POLYMORPHISM
NO SI

38 AFLP Fingerprinting Marcatore associato a fenotipo SIDS ? Controlli

39 422 marcatori AFLP analizzati 2 marcatori polimorfici
Cc Cc Ma Ma Cu Cu Fe Cc Cc Ma Ma Cu Cu Fe Cc Ma Cu Fe SIDS 2 422 marcatori AFLP analizzati 2 marcatori polimorfici 2 Midollo allungato SIDS 1 446 marcatori AFLP analizzati 16 marcatori polimorfici 9 Corteccia cerebrale 9 Midollo allungato