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Lab. Chimica Analitica II _HPLC Applicabile a: amminoacidi proteine acidi nucleici idrocarburi carboidrati prodotti farmaceutici pesticidi antibiotici.

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Lab. Chimica Analitica II _HPLC. Lab. Chimica Analitica II _HPLC Cromatogramma di eluizione LSC.

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1 Lab. Chimica Analitica II _HPLC Applicabile a: amminoacidi proteine acidi nucleici idrocarburi carboidrati prodotti farmaceutici pesticidi antibiotici steroidi

2 Lab. Chimica Analitica II _HPLC Effetto della dimensione delle particelle e del flusso sullaltezza H del piatto teorico Dimensioni colonna: 30 x 2.4 mm Soluto: N,N-dietil-n-aminoazobenzene Fase mobile: esano, CH 2 Cl 2, isopropanolo Effetto della dimensione del campione sullaltezza H del piatto teorico

3 Lab. Chimica Analitica II _HPLC

4 Lab. Chimica Analitica II _HPLC Requisiti: Pressioni fino a 430 atm Uscita priva di pulsazioni v flusso da 0.1 a 10 ml/min componenti resistenti alla corrosione controllo di flusso ad alta riproducibilità Tipi di pompe utilizzati: alternative a pistone o diaframma a siringa o a spostamento pneumatiche o a pressione costante

5 Lab. Chimica Analitica II _HPLC

6 Lab. Chimica Analitica II _HPLC Problematiche:: Accuratezza e precisione dipendenti dalla siringa Difficilmente applicabili ad automazione

7 Lab. Chimica Analitica II _HPLC Caratteristiche del rivelatore ideale : Sensibilità adeguata Buona stabilità e riproducibilità Risposta lineare in un ampio intervallo Tempo di risposta breve Elevata affidabilità e facilità duso Fattore di risposta uniforme o sensibilità specifica Metodo di rivelazione non distruttivo Volume interno minimo per ridurre lallargamento di banda Tipi di rivelatori: proprietà di massa: indice di rifrazione, costante dielettrica, densità proprietà del soluto: assorbanza UV-Vis, fluorescenza, corrente di diffusione

8 Lab. Chimica Analitica II _HPLC

9 Lab. Chimica Analitica II _HPLC Cella di flusso a Z: V = 1 – 10 l l = 2 – 10 mm p max = 40 atm noti anche come rivelatori a lunghezza donda fissa utilizzano una lampada Hg a bassa pressione basso livello di rumore (2 x AU) non sensibile a variazioni di temperatura, flusso, composizione della fase mobile Lungo tempo di vita della lampada (> 1 anno) fissa: 254, 250, 313, 334, 365 nm

10 Lab. Chimica Analitica II _HPLC spettrofotometro a scansione con reticoli a diffrazione possibilità di registrare un cromatogramma a fissa o a diverse per ogni picco possibilità di utilizzo di rivelatori diode array possibilità di ottenere diagrammi 3D Spettri di assorbimento delleluito di una miscela di tre steroidi, acquisiti ad intervalli di 5 secondi

11 Lab. Chimica Analitica II _HPLC rivelatori a tre filtri a cuneo semicircolari 4000 – 690 cm -1 rivelatori FT-IR l = 0.2 – 1 mm, V = 1.5 – 10 l utilizzano rivelatori fotoelettrici a 90° rispetto al raggio deccitazione Sorgente a Hg o Xe, filtri o monocromatori a reticolo per isolare la radiazione elevata sensibilità possibilità di incrementare la fluorescenza mediante trattamento preliminare dei campioni (es. 5-dimetilaminonaftalen-1-solfonil cloruro = cloruro di dansile) Possono avere limiti di linearità inferiori ai rivelatori di assorbanza (0.1 AU)

12 Lab. Chimica Analitica II _HPLC Possono rivelare la maggior parte dei soluti, purché RI del soluto sia diverso da quello della fase mobile Sensibili alla temperatura, non al flusso Sensibilità inferiore agli altri rivelatori Non applicabili alleluizione in gradiente Utili su scala preparativa

13 Lab. Chimica Analitica II _HPLC Basati su: amperometria, coulombometria, voltammetria, conduttimetria Elettrodo in Pt, Au, grafite vetrosa o pasta di grafite V = 1 – 5 l Applicabile alla determinazione di disolfuri e tioli

14 Lab. Chimica Analitica II _HPLC Rivelatori a spettrometria di massa Rivelatori NMR

15 Lab. Chimica Analitica II _HPLC

16 Lab. Chimica Analitica II _HPLC Cromatogramma di eluizione LSC

17 Lab. Chimica Analitica II _HPLC

18 Lab. Chimica Analitica II _HPLC Reazioni di silanizzazione per la produzione di fasi legate Possibili gruppi funzionali sulla superficie della silice

19 Lab. Chimica Analitica II _HPLC Effetto della lunghezza di catena sulle prestazioni di una colonna di silossano in fase inversa riempita con particelle di 5 m. MeOH: H 2 O = 50%, 1ml/min

20 Lab. Chimica Analitica II _HPLC

21 Lab. Chimica Analitica II _HPLC

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