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VALUTAZIONE DELLA PERMEABILITA INTESTINALE MEDIANTE TEST DEL DOPPIO ZUCCHERO VALUTATO SU SIERO CON METODICA HPLC Dott.ssa Katouzian Forough 12 Dicembre.

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1 VALUTAZIONE DELLA PERMEABILITA INTESTINALE MEDIANTE TEST DEL DOPPIO ZUCCHERO VALUTATO SU SIERO CON METODICA HPLC Dott.ssa Katouzian Forough 12 Dicembre 2005

2 Introduzion La permeabilità intestinale viene solitamente studiata usando il test di assorbimento di 2 zuccheri lattulosio/mannitolo o lattulosio/ramnosio. Le urine (raccolta di 5 ore) sono il liquido biologico su cui dosare gli zuccheri. Sono zuccheri di origine sintetica, non sono presenti nella dieta e non sono metabolizzati dallorganismo. Il lattulosio è un disaccaride di PM viene assorbito per via paracellulare mentre il ramnosio è un monosaccaride di PM e viene assorbito per via transcellulare

3 Epitelio intestinale in condizione normale è impermeabile al lattulosio per la sua dimensione mentre è permeabile al ramnosio Epitelio intestinale in condizione normale è impermeabile al lattulosio per la sua dimensione mentre è permeabile al ramnosio Assorbimento dei due zuccheri risulta alterato se intervengono infezioni batteriche o virali ed in particolari situazioni patologiche (malattia celiaca, morbo di crohn) Assorbimento dei due zuccheri risulta alterato se intervengono infezioni batteriche o virali ed in particolari situazioni patologiche (malattia celiaca, morbo di crohn) Il test si basa sulla somministrazione per via orale dei due zuccheri e sul successivo loro dosaggio sulle urine mediante HPLC Il test si basa sulla somministrazione per via orale dei due zuccheri e sul successivo loro dosaggio sulle urine mediante HPLC

4 SCOPO DELLA RICERCA 1.Semplificare lo studio della permeabilità intestinale mediante test sierologico su goccia di sangue del rapporto lattulosio/ramnosio. 2. Valutare lazione di sostanze capaci di modulare in maniera reversibile la permeabilità della via paracellulare con conseguente variazione nellassorbimento dei due zuccheri. 3. Dosare questi zuccheri, dopo somministrazione per via orale, su micro campioni di siero (50µl) utilizzando la tecnica di HPLC.

5 ATTIVITA SVOLTA 1. 1.Determinazione della minima dose efficace, sulla permeabilità epiteliale di un nuovo modulatore della via paracellulare (esapeptide sintetico) Studio della sua cinetica dazione 3. 3.Verificare la cinetica del transito di macromolecole attraverso la mucosa intestinale resa permeabile dalla molecola sopra descritta.

6 Esapeptide sintetico : NH 2 -FCIGRL-COOH presente in Zot. V.Cholerae cleavage site 1msifihhgap gsyktsgalw lrllpaiksg rhiitnvrgl nlermakylk mdvsdisief 61idtdhpdgrl tmarfwhwar kdaflfidec griwpprlta tnlkaldtpp dlvaedrpes 121 fevafdmhrh hgwdiclttp niakvhnmir eaaeigyrhf nratvglgak ftltthdaan 181 sgqmdshalt rqvkkipspi fkmyastttg kardtmagta lwkdrkilfl fgmvflmfsy 241 sfyglhdnpi f tggndatie seq sepqska tagnavgska vapasfg fcigrl cvqdgfv 301 tvgderyrlv dnldipyrgl watghhiykd kltvffetes gsvptelfas syrykvlplp 361 dfnhfvvfdt faaqalwvev krglpikten dkkglnsif 12 KDa c-terminal fragment (ΔG)

7 DETERMINAZIONE DELLA MINIMA DOSE EFFICACE ad ogni topo è stata somministrata 100µl di soluzione contenente 12mg Lact e 8mg Rh (Clin.Chim.Acta 2005,352, 191) no mice esapeptide L/R ± μg 0.052± μg 0.060± μg 0.169±0.0019

8 chromatogramma di minma dose efficace Black line: standard Lactulose Orange line: standard L-Rhamnose Violet line:serum of m. treated with 250 Blu line: serum of m. treated with 100 lact Rh

9 Sinthetic peptides h. P+S Blood sample SSSSS RESULTS 2. BIOLOGICAL ACTIVITY OF 1: FCIGRL, 2: GRLFCI, 3: FMIGRL, 4: GGVLVQPG DURING 24 h. AFTER ORAL ADMINISTRATION OF SINGLE DOSE (250 μg) IN 6 GROUPS (2 animals/group) OF MICE. 1: : ND ND ND ND Lactulose/Rhamnose ratio results

10 Chromatogram of analysis of serum in the presence of exapeptide at1h and 7h after administration of sugars. The black line: after 1h The green line: after7h. lact Rh

11 Chromatogram of analysis of serum in the presence of exapeptide and scrambled at1h and after administration of sugars black line:exapeptide after 1h green line: scrambled after 1h lact Rh

12 Chromatogram of analysis of serum in the presence of exapeptide at1h and 24h after administration of sugars The black line after 1h the pink line after16h. lact Rh

13 CONCLUSIONE 1. Esapeptide altera la permeabilità intestinale. 2. Questo effetto è immediato a dose efficace (250µg) ed è reverssibile entro 16h. 3. La reversibilità dellazione dimostra che la mucosa intestinale non viene danneggiata. 4. La prolungata attivita sulla via paracellulare e la conseguente alterata permeabilità offre la reale possibilità di trasferire macremolecole o farmaci, incapaci di attraversare la bariera intestinale,nel circolo sistemico.


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